mRNA提取试剂盒的说明书.pdf

08-04 mRNA Purification Kit ® MagExtractor - mRNA - (Code No.: NPK-801) 使用说明书 研究用 TOYOBO CO., LTD. Life Science Department OSAKA JAPAN 目 录 [1] 前言1 [2] 纯化流程概要1 [3] 对应样品1 * [4] 试剂盒中所包含的物品（5 次份） 3 [5] 试剂盒以外所需要的其他物品4 [6] 处理RNA 时的注意点 4 [7] 操作程序5 1. 从培养细胞，组织中直接抽提MRNA 的方法5 (1) 制备溶解液5 (2) 样品的前处理5 (3) mRNA的纯化(第一次)6 （4 ）DNase I处理 7 (5) mRNA的纯化(第二次)8 2. 从TOTAL RNA 中纯化MRNA 的方法9 （1）制备溶解液9 （2 ）Total RNA 的DNase I 处理9 （3 ）mRNA 的纯化（第一次）10 (4) mRNA的纯化（第二次）11 [8] 抽提实例12 [9] 疑难解答13 [10] 相关商品15 【注意 】 本试剂盒中所包含的都是研究用试剂。请不要用于诊断，临床等用途。在使 用本试剂盒的时候，请严格遵守实验室的基本注意事项，并注意安全。 [1] 前言 本试剂盒是用oligo(dT) 固定化了的磁珠粒来纯化mRNA (poly(A)+ RNA) 的试 剂。因为使用的是磁珠，可以通过使用磁台架，最低限度地减少复杂的离心操作， 迅速的纯化mRNA 。使用本试剂盒从Total RNA 、培养细胞、组织等中得到的 mRNA主要能作为RT-PCR ＊、cDNA克隆，cDNA Array （参照本公司Gene NavigatorTM cDNA Array Filter、Gene NavigatorTM cDNA Array System ；参照p. 14 的「[10] 相关商品」） 的模板来使用。 要注意的是，本试剂盒不适用于本公司的自动核酸抽提装置（MFX-2000 、 6000、9600 ）。 性能·特征 ·可以从培养细胞，组织等各种样品中直接纯化出mRNA。 ·能够从Total RNA中纯化出mRNA。 ·不含苯酚、氯仿等危险可溶物质。 ·采用了 DNase I 处理以及两次纯化步骤的操作程序，因此可以纯化出高纯 度的mRNA。 ＊ Hoffmann La Roche 公司拥有 PCR 的专利。 [2] 纯化流程概要 利用 mRNA 进行的 RT-PCR 、cDNA 克隆、cDNA Array 等实验是否成功很 大程度上取决于 mRNA 的品质和纯度。 为此，本试剂盒采用了 DNase I 处理以去除基因组 DNA ，以及通过重复两 次纯化工艺来达到最小限度抑制 rRNA 混入的标准操作程序。 操作程序 用途 第一次纯化 RT-PCR