中学生物实验教学4-12(观察根尖分生组织细胞有丝分裂 ).ppt

四川师范大学生命科学学院 张小勇 生物教学论实验 四川师范大学生命科学学院 张小勇 综合实验4 实验4-12 观察根尖分生组织细胞的有丝分裂 【实验目的】 根尖、茎尖的分生区、茎形成层、愈伤组织可观察到有丝分裂。 【实验原理】 在高等植物体内，有丝分裂常见于根尖、芽尖、茎形成层等分生区细胞。由于各个细胞的分裂是独立进行的，因此在同一分生组织中可以看到处于不同分裂时期的细胞。通过在高倍显微镜下观察各个时期的细胞内染色体（或染色质）的存在状态，就可以判断这些细胞各处于有丝分裂的哪个时期，进而认识有丝分裂的完整过程（如图1细胞周期）。染色体容易被碱性染料（如改良苯酚品红染液）着色。 植物细胞周期示意图 【实验准备】 2、实验材料的准备 （1）根尖的培养： （2）根尖取材与固定： 1、实验试剂的准备： （1）固定液的配制。用三份95%酒精和一份冰醋酸混合进行配制。 （2）解离液的配制。用38%盐酸和95%酒精以1∶1混合进行配制。 （3）染色液的配制。 ①培养根尖：应每天换水 (防止水中缺氧烂根) ②取材：取生长旺盛、带有分生区的根尖，长度 为根尖的2-3mm。 ③解离：解离液（15%盐酸∶95%酒精溶液＝1∶1）； 时间：室温3-5分钟，至根尖酥软； （时间短则细胞没有完全分离，长则可能使根尖烂掉） 目的：使组织细胞分离开，杀死并固定细胞 ④漂洗：用清水漂洗10min，目的是洗去组织中的解 离液，便于染色(防止酸碱中和)。 【实验方法和步骤】 ⑥压片：目的是使细胞分散开。方法（用镊子弄碎根尖，盖上盖玻片，再放上一块载玻片，压片）（压片过重过猛可能将组织压碎、压烂；过轻则细胞未充分分散开而重叠。） ⑦低倍镜观察：找到分生区细胞（特点：细胞呈正方形，排列紧密，有的细胞正在分裂） ⑧高倍镜观察：找各时期细胞。可见处于间期的细胞最多，中期最少。不能看到某个细胞连续分裂的过程，因细胞在解离时已被杀死。 ⑤染色：染液（0.01g/mL的龙胆紫或0.02g/mL的醋酸洋红）;时间为3－5分钟；目的是使染色体或染色质被碱性染料染成深色，便于观察。 【实验指导】 1、交代实验目标 2、交代实验过程 步骤一：洋葱根尖临时装片的制作 步骤二：用显微镜观察 步骤三：绘图 【实验结果记录】 计数细胞的 总数 末期 后期 中期 前期 分裂期 间期 每一时期的细胞数/计数细胞的总数 总数 样本2 样本1 细胞 周期 【制片成功的要点】 ①剪取根尖时，一定要剪取生长旺盛、带有分生区的根尖，同时注意关照取的时间，一般在中午10点左右至下午2时，分裂旺盛，剪取洋葱根尖2～3 mm。当根长到2～3cm时在11时左右可以取材，取材长度以5mm左右为宜。 ②解离充分是实验成功的必要条件。剪取的洋葱根尖，立即放入盛有盐酸和酒精混合液（1:1）的玻璃皿中，在室温下解离3～5 min，至根酥软为止。解离中，应注意时间的把握，不能太长也不能太短。解离太长使细胞的结构破坏，影响制片的效果，太短则不易使细胞分散，观察时细胞容易重叠。解离后细胞已被盐酸杀死，不具备活性。 【制片成功的要点】 ③染色目的是使细胞的细胞质和细胞核及核中的染色体分别染上深浅不一的颜色，以便清晰地观察细胞分裂各个时期的特征。染色不能过深，否则不易观察细胞中的染色体。 ④漂洗的目的是洗去多余的盐酸，防止解离过度和影响染色。由于染色剂是碱性染液，如不漂洗，酸碱发生反应，不利于着色；同时也是为了洗去药液，防止解离过度。用镊子把酥软的根尖取出，放入盛有清水的玻璃皿中漂洗约10 min。 ⑤压片时，先用镊子将根尖弄碎，盖上盖玻片；在盖玻片上加一片载玻片，用拇指轻压载玻片。压片时用力必须适当，过重会将组织压烂，过轻则细胞为分散。 【观察成功的要点】 ①教师教给学生观察要领。让学生观察时，强调先用低倍镜观察，再转高倍镜观察，切忌直接使用高倍镜。 ②在一个视野中不能观察到一个细胞有丝分裂的连续过程，因为细胞在解离时已经被杀死，不再进行细胞分裂了。因此在一个视野中，我们只能找到某一时期的细胞图像，要找全有丝分裂各时期细胞，其方法应慢慢地移动装片，在不同的视野中寻找。 ③确认一个细胞周期中各个时期的长短，其方法就是看在这一时期中观察到的细胞的多少。 ④增加演示实验。教师在实验课前准备5台示范镜，分别示范有丝分裂固定装片中的间期、前期、中期、后期和末期5各不同时期。 (1)解离的目的是什么？如果解离时间过短会造成什么后果？ (2)如果漂洗不干净会有什么结果？ (4)在分生区能不能看到细胞正在分裂？有何特点?