生物技术制药 第二章 基因工程制药2.pdf

第二章 基因工程制药 载体 第一节 载体的基本知识 载体的构建和选择是基因工程的重要环节 之一，是基因工程成败的关键之一。 外源基因很难进入受体细胞，即便进入受 体细胞，也很难复制、表达。因此，外源基因 需借助载体进入宿主细胞。 一、载体的概念 • 载体 载体(vector)就是把外源基因引入受体细 胞，并在其中能自我复制表达的小型DNA分子。 • 载体来源 来源于原核微生物质粒或噬菌体DNA分子。 • 载体作用 可以供插入、克隆目的基因DNA 具有运载外源DNA导入宿主细胞的能力 可以在受体细胞内翻译表达的能力 • 载体的命名 最初发现的质粒均由研究者根据表型、大小 等特征自行命名，如F因子(fertility factor，致 育因子)、R质粒(resistance factor，抗性质粒)和 Col质粒(colicin，大肠杆菌毒素质粒)等。 命名规则： 质粒的名称一般由三个英文字母及编号组成， 第一个字母一律用小写p表示，后两个字母应大写， 可以采用发现者人名、实验室名称、表型性状或 其他特征的英文缩写。 编号为阿拉伯数字，用于区分属于同一类型的 不同质粒，如pUC18和pUC19等。 二、作为基因工程载体所必须具备的条件 ①具有复制原点 ori，能自我复制； ②具多克隆位点， 即有多种限制酶 的切点； ③两个以上的选 择标记，如抗生 素基因； ④拷贝数要高， 稳定代传； ⑤序列全掌握， 缺失mob基因。 三、载体的分类 依据用途的不同： 克隆载体 穿梭载体 表达载体 •以繁殖DNA •既能在真核 •用来将克隆 片段为目的 细胞又能在 的外源基因 的载体。 原核细胞繁 在寄主细胞 殖的载体。 内表达成蛋 白质的载体。 依据来源和性质不同： 质粒载 体 人工染