电化学发光的临床应用.pdf

电化学发光免疫测定及其临床应用 罗氏诊断.巴塞尔.瑞士 目录 第一篇 电化学发光免疫测定 一、化学发光反应 （一）氨基苯二酰肼类参加的CL 反应 口丫啶酯参加的CL 反应 （二） （三）Dioxatene 参加的 CL 反应 （四）电化学发光反应 二、电化学发光免疫测定 （一）试管内的化学反应 （二）流动池中的电化学发光反应 三、Elecsys 系列全自动电化学发光免疫分析系统 （一）Elecsys1010 全自动免疫分析仪 （二）Elecsys2010 全自动免疫分析仪 （三）E170 免疫分析模块 第二篇 临床应用 第三篇 检测项目 一、甲状腺功能 二、激素 三、肿瘤标志 四、心肌标志 五、骨标志 六、 感 染 性 疾 病 七、贫血 八、糖尿病 九、 过 敏 反 应 十、 药 物 第一篇 电化学发光免疫测定 1959 年 Berson 和 Yalow 建立了放射免疫分析方法（RIA ），大大提高了免疫测定的敏感度。这种标记免疫测定开拓 了医学检验的新领域，应用于激素、蛋白质、感染性疾病的抗原和抗体以及药物等的微量测定。 由于RIA 有放射性污染等缺点，不少学者进行了新标记物的探索。 1971 年 Engvall 和 Perlman 建立了固相酶免疫测定方法（ELISA ），这种非放射标记免疫测定在临床检验，特别是 感染性疾病的诊断中取得了广泛应用。但是，因 ELISA 最后测定的是颜色的光密度，其精密度和敏感性达不到 RIA 水 平。 化学发光免疫测定（CLIA ）出现于20 世纪 90 年代。由于最后测定的是光子的量，不但对检测者无害，其敏感度 和精密度均优于 RIA ，而且试剂稳定，并可进行全自动分析，是理想的标记免疫测定方法。1996 年发展的电化学发光 免疫测定（ECLIA ）在发光反应中加入了电化学反应，并结合各种免疫测定的先进技术，是目前最先进的化学发光免疫 测定系统。 一、化学发光反应 在常温下，一些特定的化学反应产生的能量使其产物或反应中间态分子激发、形成电子激发态分子；当其衰退至基 态时，所释放出的化学能量以可见光的形式发射，这种现象称为化学发光（chemiluminescence，CL ）。能产生CL 反应 的物质称为化学发光剂或化学发光底物。CL 反应绝大多数属于氧化反应。因为该反应能提供足够的能量使其产物分子 或反应中间态分子上升至电子激发态。目前应用在免疫测定中的重要 CL 反应有以下几类。 （一）氨基苯二酰肼类参加的CL 反应 这类反应需有催化剂（如过氧化物酶，POD ）的参与。主要是鲁米诺（luminol ）及异鲁米诺衍生物。发射光的波 长为 375 －550nm，以425nm 波长为主。鲁米诺的分子结构及 CL 反应式如下： 口 （二）丫啶酯参加的CL 反应：这类化学发光剂不需要催化剂的参与，在过氧化氢的稀碱溶液中即能发光。发射光 的波长为430nm 。反应式如下： （三）Dioxatene 参加的 CL 反应：化学发光剂为 Adamantyl 1,2−二氧杂环丁烷芳基（dioxatene ）磷酸盐，反应需有 碱性磷酸酶（AP ）参与。反应式如下： （四）电化学发光反应：电化学发光（electro －chemiluminescence，ECL)是一种在电极表面由电化学引发的特异性 化学发光反应，实际上包括了电化学和化学发光两个过程。化学发光剂三联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+( 图 1）和电子供体三丙胺 （TPA ）在阳电极表面同时各失去一个电子发生氧化反应（图2 ）。二价的[Ru(bpy) ]2+被氧化成三价，后者是一种强氧 3 +