电泳技术及其在医学中的应用--常若云.pdf

电泳技术及其在医学中的应用 甘肃省临床检验中心 常若云 1.原理： 血清蛋白电泳是临床实验室了解血清蛋白质 全貌的筛选试验。本试验是以一定浓度的琼脂糖 凝胶作为介质，基于区带电泳技术的原理，在特 定的PH下，依据不同血清蛋白质带电荷的不同， 将血清蛋白质分成主要的五个区带：白蛋白 （ALB ）、α1－球蛋白、α2－球蛋白、β－球蛋 白和γ－球蛋白，每个蛋白区带包括有一种或多 种血清蛋白质。血清蛋白电泳测定的各组分的量， 通常采用各区带的浓度百分比表示。 血清蛋白电泳原理 _ _ _ - _ _ + 阴极 阳极 _ _ _ _ _ _ 加样点 负电荷蛋白质在 碱性缓冲液介质 碱性缓冲液中 Serum protein fractions Albumin a1: Orosomucoid, a1 Antitrypsin a2: Haptoglobin, a2 Macroglobulin, a Lipoprotein, Ceruloplasmin b : Transferrin, Hemopexin, C3 Complement, b Lipoprotein g : Immunoglobulins 蛋白质分离方式 固体或液体介质  琼脂糖凝胶是现今最常用的固体介质。  液体介质常用在毛细管电泳技术。 分析步骤  准备胶片。  加血清样品。  蛋白质在电场下迁移被分离。  染色，脱色  密度测定 不同的分析类型  手工操作  凝胶电泳－半自动技术  毛细管电泳－全自动技术 2.标本的采集和处理 非抗凝试管收集静脉血，分离得新鲜血 清，不能及时检测的标本可及时存放于2 － 8℃保存一周以内，冻存的标本可保存至少 一月，冻存时如用0.02g/dL的叠氮钠可提高 保存的稳定性。 注：保存时避免硼酸；避免溶血标本，溶血 可抬高α 2和β 区带；避免血浆标本，纤维 蛋白原条带可被误认为一单克隆免疫球蛋白 并抵消相应区带的百分比。复融时由于标本 蛋白质和脂蛋白的降解可出现微小条带，在 2－8℃保存或冻存的标本中β －脂蛋白的阳 性电荷从β 区带向α 2或α 1区带转移，时间 越长转移越多。 3.试剂： 本实验室各种试剂均购与法国SEBIA公司 琼脂糖凝胶胶片 缓冲条 氨基黑染液 加样梳 薄滤纸 脱色液 冲洗液 毛细管电泳原理 加热桥 Temperature controlled by Peltier elements 迁移 监测器 氘灯