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第四章 水中的细菌学测定 四、水中总大肠菌群的测定 （二）四管发酵法 此法在测定时只需4个发酵管，水样根据其污染程度进行稀 释，每一水样在测定时都有4个接种水样量（表4 －5），其他检 验同多管发酵法。 第四章 水中的细菌学测定 四、水中总大肠菌群的测定 （二）四管发酵法 2.试验步骤（以轻度污染者为例） （1）将水样作1 ：10稀释 （2）分别取1mL1 ：10稀释水样及1mL原水样，分别注入装有10mL乳 糖蛋白胨培养液的试管中（内有倒管）；另取10mL原水样注入一支装 有5mL三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的试管中（内有倒管）；再取 100mL原水样注入一支装有50mL三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的大试管 或锥形瓶中（内有倒管）。以下的检验步骤同多管发酵法。 （3）根据证实有总大肠菌群存在的阳性管数查表4-6 、4-7 、4-8 。报告 每升水样中的总大肠菌群数。 第四章 水中的细菌学测定 四、水中总大肠菌群的测定 （三）滤膜法 滤膜是一种微孔性薄膜。将水样注入已灭菌的放有滤膜（孔径 0.45μm）的滤器中，经过抽滤，细菌即被截留在膜上，然后将滤膜 贴于品红亚硫酸钠培养基上，进行培养。因大肠菌群细菌可发酵乳 糖，在滤膜上出现紫红色具有金属光泽的菌落，计数滤膜上生长的 此特性的菌落数，计算出每1L水样中含有总大肠菌群数。如有必要， 对可疑菌落应进行涂片染色镜检，并再接种乳糖发酵管做进一步鉴 定。 第四章 水中的细菌学测定 四、水中总大肠菌群的测定 （三）滤膜法 1、培养基 （1）品红亚硫酸钠培养基 蛋白胨 10g 磷酸二氢钾 3.5g 牛肉浸膏 5g 蒸馏水 1000mL 酵母浸膏 5g 无水亚硫酸纳 约5g 乳糖 10g 5%碱性品红乙醇溶液 20mL 琼脂 20g 制作方法同多管发酵法用品红亚硫酸钠培养基。 （2）乳糖蛋白胨培养液（见本节多管发酵法） 第四章 水中的细菌学测定 四、水中总大肠菌群的测定 （三）滤膜法 1、培养基 （3 ）乳糖蛋白胨半固体培养基 蛋白胨 10g 蒸馏水 1000mL 牛肉浸膏 5g 乳糖 10g 酵母浸膏 5g 琼脂 5g 左右 将上述成分加热溶解于1000mL 蒸馏水中，调整pH为7.2-7.4 ，过滤 后分装于小试管内，置高压蒸汽灭菌器，在115℃灭菌20min 。冷却置于 冰箱内保存。此培养基存放以不超过两周为宜。 第四章 水中的细菌学测定 四、水中总大肠菌群的测定 （三）滤膜法 2 、试验步骤 （1）过滤水样 ① 滤膜及滤器的灭菌。将滤膜放入烧杯中，加入蒸馏水，置于 沸水浴中煮沸灭菌3次，每次15min。前两次煮沸后需更换水洗涤2～ 3次，以除去残留溶剂。也可用121 ℃灭菌10min，10min一到，迅速 将蒸汽放出，这样可以尽量减少滤膜上凝集的水分。 滤器、接液瓶和垫圈分别用纸包好，在使用前先经121℃高压蒸汽 灭菌30min 。滤器灭菌也可用点燃的酒精棉球火焰灭菌。 第四章 水中的细菌学测定 四、水中总大肠菌群的测定 （三）滤膜法 2 、试验步骤 （1）过滤水样 ② 过滤装置安装。以无菌 操作把滤器装置依照图4-5装 好。 第四章 水中的细菌学测定 四、水中总大肠菌群的测定 （三）滤膜法 2