几种收涩中药对血管生成与S-%2c180-肉瘤MMP9表达地影响.pdf

几种收涩中药对血管生成及S¨o内瘤删P9表达的影响 实验研究 一、收涩中药对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成的影响 (一)实验材料 1．实验动物 产出时间在一周以内，由山东省农科院家禽所养殖场提供。 2．实验仪器 恒温孵育箱，山东潍坊医疗器械厂；医用图像分析仪(Image—ProPlus)，美国； 摄像机(JVc 医用离心机厂；超低温冷冻冰箱(Foram)，美国；研究显微镜；冷光源；解剖显微镜， 司医疗设备厂；牙科钻，上海医疗器械有限公司；大鼠固定器，保温箱，实验室自制。 3．实验药品 五味子、乌梅、五倍子、椿皮、金樱子、赤石脂、禹余粮，由山东中医药大学门 诊部提供，经学校中药专家鉴定质量符合实验要求，五昧子为木兰科多年生落叶木质 chinesis Rehd．et 藤本植物北五味子Shsandra Baill．和南五昧子S．sphenanthera w订s．的成熟果实，此品为北五味子的成熟果实，乌梅为蔷薇科落叶乔木植物树 Prumus mume(Sieb)Sieb．et Zucc．的未成熟果实(青梅)的加工熏制品，五倍子为 chinensis 漆木科落叶灌木或小乔木植物盐肤木Rhus Mill．叶上寄生的虫瘿，赤石脂 末状矿石，椿皮为苦木科落叶乔木植物臭椿Ailanthus 根皮或树皮，金樱子为蔷薇科常绿攀缘灌木植物金樱子Rosa Michx．的成 laevigata 熟的假果或除去瘦果的成熟花托，此品为成熟的假果；阳性对照药为凌草合剂，已被 证明可以抑制血管生成；l‰新洁而灭，济南为民制药厂，批号：000417；明胶海绵， 高锰酸钾，江苏南京中山集团公司化工厂，批号：980716；戊巴比妥钠，上海化学试 剂采购供应站分装厂，批号：86一。卜22。 山东中医药走学2004届硕士学位论之 (二)实验方法 1．药物血清的制备 (1)动物的选择及分组 实验选取标准Wistar大鼠70只。随机分为高剂量组、低剂量组、生理盐水对照 组。 (2)给药方法及剂量 大鼠适应两天之后开始灌胃给药，每日一次，连续给药七日。剂量参考刘氏报道 的给药剂量‘”，高剂量为临床剂量的16倍，低剂量为临床剂量的8倍。五味子大剂 (3)血清制备 于末次给药两小时后，动物麻醉，下腔静脉取血5ml，3000转／分离心，取血清 置于零下70℃冰箱保存备用。 2．鸡胚绒毛尿囊膜模型的建立 (1)鸡胚绒毛尿囊膜的培养 ①种蛋的选择：选择白皮种蛋(海兰种种蛋)，表面清洁，蛋壳均质，每蛋509一659， 蛋形规范，气室、气孔均匀，种蛋受精率gO％。 ②种蛋的消毒：种蛋用温水(40—45 6C)清洗2次后，于l：1000新洁尔灭液中浸 泡3分钟。 ③种蛋的孵育：种蛋孵育于普通培养箱中，温度37．8 oC，培养箱中放入水盘 (1000ml水杯)以保持湿度在65％一70％。 ④孵育中的转蛋：在孵蛋的过程中不停的转蛋，可防止胚胎发生粘连，促进羊膜运 动，种蛋钝端(大头端)向上，呈45。倾斜，每天转蛋2-4次。 ⑤鸡胚的检查：鸡胚的检查采用自制照蛋灯(使用聚光灯光源)。每日检查胚胎发 育情况，识别胚胎发育的标志特征，随时淘汰死弱精种蛋和死胎以及胚胎发育不良的 种蛋。 ⑥假气酆JSJJ备：于第3r9天，在照卵灯下观测，确定鸡胚绒毛尿囊膜位置，先 4 几种收涩中药对血管生成及sⅢ内瘤MMP9表选的影响