九香止泻颗粒对致泻性海洋弧菌影响与其防治急性腹泻相关作用机理地的研究.pdf

湖南中医药大学硕士毕业论文 昆明种小鼠，雌雄各半，体质量18—22g，由湖南农业大学动物 实验用小鼠均在日常条件下饲养3d后进行试验。鼠颗粒饲料均由湖 南中医药大学实验动物中心提供。 实验环境条件：雌雄分笼饲养，每笼10只，其中腹泻指数实验小 鼠单笼饲养。实验室内配有空调恒温，室温：25℃±2℃，相对湿度： 2 65％±5％，光照1h明，12 h暗，标准饲料，全营养喂养，自由饮 o 水，笼具每天清洗消毒1次，紫外灯灭菌1min，每周空气消毒1次， 通风良好。 小鼠灌胃体积为：20 mL／kg。 1．4菌种 副溶血弧菌由湖南省商品进出1：2检验检疫局食品检验检疫科提供， 0603。 购自大连海事检验中心，批号：2005 1．5仪器 生物显微镜；超净工作台；血球计数板；抗菌实验用琼脂打孔器 (中6m m)；柳叶刀等。722型分光光度计，上海菁华科技仪器有限公 司生产。电子称：EPs一3001型，长沙湘平科技发展有限公司生产。 2方法 2．1九香止泻颗粒对致泻性海洋弧菌的影响“1 增菌，37。C培养，取对数生长的菌液。使用时用麦氏计数法，将菌液 L。 浓度调整为1×109个／nl 2．1．2抑菌实验采用琼脂扩散法(打孔法)。制备我妻氏血琼脂平 板，无菌检查后，进行抗茵实验：取0．1mL副溶血弧菌菌液(菌液浓 0 度为1．5×1 孔器在我妻氏血琼脂平板的表面打孔，每个平板上打3孔，各孔中心 ， 湖南中医药大学硕士毕业论文 24 h培养后，观察抑茵圈的有无，有者用游标卡尺准确量取抑菌圈直 径。同样探|作重复9次。同时设诺氟沙星胶囊和肠康片对照孔。 mL 制备3．5％NaCl肉汤培养基：NaCl3．59加入布氏肉汤培基100 中即得。加热溶解，分装于试管，每管1 解成lg／mL，实验用3．5％NaCl肉汤培养基将药液进行对倍稀释1： 1024，共10管。同时设含茵不加药的菌液对照，加药不加菌的药物对 照，不加菌不加药的培养基对照。(3)每管加入0．05mL副溶血孤菌 菌液，37℃、24h培养，肉眼观察，以能抑制细菌生长的最高药物 稀释倍数即为最低抑菌浓度(MIC)。 mL， 2．1．4药物的MBC测定取MIC以上无细菌生长的培养物0．1 h 倾注于不合药物的我妻氏血琼脂培养基，待培基冷凝后，37℃、24 培养，观察有无细菌生长，以无菌生长的浓度即为药物的最低杀菌浓 度(MBC)。 2．2九香止泻颗粒对新斯的明引起的小鼠小肠功能亢进的影响乜1 2．2．1动物分组及给药方法取小鼠60只，雌雄各半，编号、称体质 量后，按体质量排序，性别、体质量分层后按随机数字表法随机分为 6组：空白对照组、新斯的明模型组、肠康片组、九香止泻颗粒低、 h，实验开始 中、高剂量组。每组10只。实验前小鼠禁食不禁水24 各治疗组均灌胃相应药物给药2次，给药间隔4h。空白对照组和模 型组灌胃同体积蒸馏水。模型组与各治疗组每只小鼠均皮下注射甲硫 5 酸新斯的明0．15mg／kg。1min后，各组小鼠均灌胃10％炭末生理盐