磷酸二酯酶抑制剂对牛和水牛卵母细胞体外成熟地影响.pdf

卵母细胞内，使卵母细胞的成熟分裂停滞。嘌呤类物质，如次黄嘌呤和腺苷，以毫摩 尔浓度添加在维持卵母细胞成熟分裂阻滞的培养基内。当培养基中添加次黄嘌呤时， et 尽管对牛卵细胞的抑制作用有限(Sirard al，1990)，但许多动物的卵母细胞自发性 et 成熟可破抑制。小鼠卵母细胞注射后，也可阻止GVBD(Shim al，1992)。次黄嘌 呤和腺苷在维持成熟阻滞方面具有协同作用，这直接与cAMPPDE活性的抑制作用及 成熟分裂阻滞水平的cAMP升高有关。次黄嘌呤和腺苷的抑制作用是可逆的、无毒性 的。 1．3成熟分裂恢复(meioticresumptionl 在动物体内，卵母细胞减数分裂成熟的恢复，发生于格拉夫氏卵泡排卵前、促性 腺激素峰应答之时。而成熟分裂的诱导是由促性激素与卵泡细胞结合引起的。配体诱 导减数分裂成熟的机理有两种假设：抑制性输入中断和正向刺激。卵巢卵泡是一个功 能性合胞体，由代谢上相互偶联的体细胞与卵母细胞所组成，代谢上的偶联是通过问 隙连接实现的。抑制性输入假设的内容是：体隔室与配子隔室间的直接交换，使该两 种细胞类型间信息的双向传输得以进行。假定负向成熟分裂调节物由卵泡细胞流入卵 母细胞，即可维持成熟分裂阻滞。cAMP是一种已被证明具有抑制能力的分子，其大 小适于通过间隙连接传输，是维持生发泡期的一种可能的物质，尽管还有其它因子参 与了成熟分裂调控。紧接着排卵前的促性腺激素峰，激素的刺激导致卵母细胞和卵丘 细胞间不再偶联，这种联系的丧失会中断抑制性物质，如cAMP的流入，间接引致成 熟分裂恢复(Downs，1993)。 成熟分裂诱导的另一种观点认为，促性腺素刺激导致了某种正向因子的产生，它 作用于卵母细胞，抑制了抑制性影响，并诱使GvBD。正向因子仍未得到鉴定，但根 据其机理推测，它的分子量小于2kD，一种可能是ca2+。有资料显示卵母细胞内ca2+ 增加cd+浓度可逆转dbcAMP对自发性成熟的抑制作用，或刺激卵泡包被的卵母细胞 成熟(Gorenetal，1990)。LH对卵泡包被的大鼠卵母细胞成熟的促进，也依赖于外 et al，1991)。cd+作用的一个部位可能是钙调素，因为该蛋白的抑制物能抑制小鼠卵 母细胞成熟。ca2+从卵母细胞内贮存库中释放，正向影响成熟分裂应答是有可能的。 ct al， 显微注射三磷酸肌醇(IP3)能克服IBMX对牛卵母细胞的成熟分裂阻滞(Homa 调节的。钙调素是ca2+的重要受体，其本身无活性，当它与Ca2+结合后，引起构象发 生变化，就成为有活性的分子。然后又调节有关酶的活性，如腺苷酸环化酶、鸟苷酸 环化酶、钙依赖性磷酸二酯酶、Ca2+．ATP酶、磷酸化酶、肌球蛋白轻链激酶及钙依赖 4 塑塑主堂堡堡皇 磷酸二酯酶抑制剂对牛和水牛卵母细胞体外成熟的影响 性蛋白激酶等。因此，细胞内Ca2+对成熟分裂恢复是必要的。 能量代谢产物是第二种可能的正向调节物。受dbcAMP阻滞、卵丘细胞包被的卵 母细胞，其配体诱导的成熟依赖于葡萄糖的摄取和代谢，去掉培养基中的葡萄糖或用 2一脱氧葡糖(一种糖酵解抑制剂)代替葡萄糖，则会抵消FSH对GVBD的诱导在含葡萄 糖的培养基中添加根皮素(一种促进葡萄糖扩散的抑制剂)，也能阻止葡萄糖摄取，从 而阻止对FSH的成熟分裂应答。此外，丙酮酸、ATP等能量代谢产物都与成熟分裂 的恢复密切相关(Downs，1993)。 2影响卵母细胞成熟的因素 2．1卵泡所处的发育阶段 ， 卵泡和卵母细胞之间在生理结构上的相互关系，导致了在卵母细胞生长成熟过程 中的卵泡大小、卵泡闭锁程度、卵泡所处的发情周期阶段和优势卵泡的出现与否等形 态结构上的差异，这些形态和结构上的变化反映了卵泡内卵母细胞的发育潜能。 在体内，卵泡是卵母细胞发生