PCR基本原理及方法.pdf

Medical Molecular Biology Principle and Applications of PCR Polymerase Chain Reaction ） Department of Biochemistry and Molecular Biology 1 Contents History of PCR Concept and principle of PCR PCR reaction system Types and Applications of PCR 2 Replication Substances Involved in DNA replication and Functions substrate (底物): 4 dNTP。合成新链的原料。 template (模板): 解开成单链的DNA母链。指引dNTP按碱 基互补配对原则合成新链。 primer ( 引物): 一段寡核苷酸序列。提供3¢-OH末端使dNTP 可以依次聚合。 polymerase (聚合酶): 依赖DNA的DNA聚合酶( DNA-pol) Other enzymes protein factors： Helicase, Topoisomerase：解链解旋，防止打结。 SSB （单链DNA结合蛋白）：稳定已解开的单链。 Primase：催化RNA 引物生成。 DNA ligase：连接两段相邻的 崎片段。 4 一、History of PCR 1、Khorana(1971)等提出在体外经DNA变性,与适当引物 杂交,再用DNA聚合酶延伸,克隆DNA的设想。 2、1983年,Mullis发明了PCR技术,使Khorana的设想得到 实现。 3 、1988年Saiki等将耐热DNA聚合酶（Taq ）引入了PCR 技术。 4、1989年美国《Science》杂志列PCR 为十余项重大科学 发明之首,比喻1989年为PCR爆炸年,Mullis荣获1993年度 诺贝尔化学奖。 5 1. History of polymerase chain reaction Pacific Coast Highway Kary Mullis He was awarded the He was awarded the Nobel Prize in 1993 for Nobel Prize in 1993 for hi