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一株甲烷利用菌的分离、鉴定和性能研究.pdf
2010年20(3) 生物技术 45
胞和Hrl细胞的生长抑制作用，结果显示，Hrl对药物的反应
3讨论
比对照细胞更加敏感。用50¨∥L的米托蒽醌处理两种细胞 ODC基因被认为具有癌基因的特性，多种肿瘤细胞中
48h后，药物对对照细胞的抑制率为25．5％而对Hrl的抑制率
ODC基因表达及其酶活性均显著增高，用ODC抑制剂处理则
为45．1％；处理72h后药物对对照细胞的抑制率为48．2％，对
能抑制肿瘤细胞的生长，由此ODC逐渐成为广受关注的抗肿
Hrl的抑制率高达70．1％；100p,g／L米托蒽醌处理48h后，药
瘤药物设计和治疗的靶点∽’5o。
物对HepG2和Hrl的抑制率分别是33．4％和60．6％，72h后
由ODC高表达导致的多胺合成增加是肿瘤细胞快速增
的抑制率分别是60．8％和83．8％(Fig．8)。
治疗中的作用，本研究中我们首先克隆出由ODC基因第3和
禽 第4外显子编码的cDNA序列，并反向插入真核表达载体
i
暑
HepG2细胞后，该质粒指导合成出能与天然ODEmRNA分子
§ 翻译起始位点处互补的反义RNA链，并由此抑制ODC的表
耋
0 达。实验中我们用RT—PCR和Western
Mitoxantrone(pS／L)
能与细胞中多胺合成途径阻断有关。随后我们检测了ODC
反义RNA对细胞周期的影响，流式细胞分析结果表明，与对
登
∞
营
1 肝癌细胞周期停滞于Gl期。当用抗肿瘤药物米托蒽醌处理
．皇
皇 细胞时，与对照细胞比较，药物对低表达ODC的肝癌细胞具
磊
有更强的抑制能力和更容易诱导其发生细胞程序性凋亡，但
罨
U ODC反义RNA增强肝癌细胞对抗肿瘤药物敏感性的机制尚
不完全明了，有待今后进一步深入研究。
参考文献：
Mitoxantrone(斗g，L) PM．Recentadvancesinthe of
[1]CaseroRA，Woster developmentpoly—
图8 ODC反义RNA增加HepG2细胞对米托蒽醌的敏感性 amine
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