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第42卷 HUAXUE)研究报告 第4期 分析化学(FENm 2014年4月 ChineseJournalof 489～494 AnalyticalChemistry 利用模拟酶催化显色和等温核酸扩增反应检测特定序列DNA 汤薇 王辉 王洪红 李正平8 (陕西师范大学化学化工学院，应用表面与胶体化学教育部重点实验室， 陕西省生命分析科学重点实验室，西安710062) 摘要基于血红素(Hemin)与G．四联体(G4)所形成模拟酶的催化作用，结合等温指数扩增反应(IEX— 量富含鸟嘌呤的单链DNA，在K+存在时，该单链DNA可形成G4结构，G4可以与Hemin结合形成具有过氧化 nm。对显色反应体系中的实验参数进行了优 (ABTS)，使体系颜色发生变化，反应产物最大吸收波长为421 化，包括Hemin浓度、ABTS浓度、H：0：浓度、IEXPAR时间和显色反应时间。在最佳条件下，所建立的体系可 以简便、快速检测0．1～10nmol／L的目标DNA分子，且本方法能够很好地区分单个碱基的差别，具有良好的 特异性。 关键词特定序列DNA的检测；等温指数扩增(IEXPAR)；Heroin-G4模拟酶；显色分析 1 引 言 核酸扩增是实现高灵敏度检测核酸的重要手段。目前常用的核酸扩增技术是聚合酶链式反应 chain (Polymerase 扩增技术得到了迅速发展uJ。等温指数扩增反应(Isothermalexponentialamplification 是Galas等建立的一种新型的核酸扩增技术旧j。结合DNA聚合酶催化的延伸反应及切刻内切酶的剪 方法，需要昂贵的实时荧光定量PCR等仪器。 (Hemin．G4)n am产生最大吸收。本研究通过设计IEXPAR反应模板，产生 氧化反应，使体系颜色发生变化，并在421 检测特定序列DNA的新方法。 2实验部分 2．1仪器与试剂 M2e多功能酶标仪(美国Molecular SpeetraMax 量PCR仪(美国Applied 磷酸的混合物(dNTPs)，购自生工生物工程(上海)股份有限公司。所有试剂均为分析纯，实验用水为二 次去离子水，并经过高压灭菌处理。 2013-07-31收稿；2013—12—19接收 本文系国家自然科学基金(No和教育部博士点基金(No．20111301130001)资助项目 }E—mail：lzpbd@snrtu．edu．cn 490 分析化学 第42卷 表1实验中所用DNA序列 Table1 DNA usedinthe sequences experiment 序列名称 序列 Name ofSequences 1 模板lTemplate 模板2 2 Template G4．DNA 5’．GGGTAGGGCGGG‘ITGGG_3’ 7 目标DNATarget—DNA 5’．GGAACAACAAGC-3 7 1MutantDNAl 5’．GGAACAACAATC-3 突变的DNA 7