第3章 物理图绘制.pdf

第第 章章 物理图绘制物理图绘制 33 1) 大分子DNA分离 2) 2) 大分子大分子DNADNA克隆克隆 3) 重叠群组建 4 ）STS作图 大分子大分子DNADNA的研究策略与方法的研究策略与方法 1) 什么是大分子DNA: 百万碱基对, Mb 2) 大分子DNA研究面临的问题: 易断裂 难分离 难克隆 , , 3) 3) 大分子DNADNA 的研究方法: : 1. 制备琼脂糖包埋法 酶切 稀有酶切位点限制酶 2. 3. 分离脉冲电泳分离 克隆 载体设计 4. 限制性内切酶如何产生大片段？限制性内切酶如何产生大片段？ 1 : DNA ） 什么是稀有切点内切酶 在基因组 顺序中只有很 少可识别序列的限制酶 一般识别位点在 碱基对之 , 6-8 间 并含有高 比。 , G/C 2) 2) 选用稀有切点限制酶注意事项选用稀有切点限制酶注意事项:: 非特异顺序识别位点，如 ， a) Hinf -G/ANTC-HinfI, BglI -GCCNNNN/NGCC- 6 ， ，实际是 碱基识别。 b) A/T , G/C 高等生物基因组一般 比较高 应选高 比限制 酶 如 可产生大片段 。 , -GC/GGCCGC-(NotI), DNA c) 基因组甲基化状态 高等生物基因组DNA 甲基化比 例很高，甲基化敏感限制酶可产生大片段。 分离大分离大 片段片段 DNADNA 脉冲交脉冲交 变电场变电场 电泳电泳 OFAGE电泳 有2对电极分别位于凝胶对角线的两端，2对 电极交替通电，产生一个交变电场。在交替改变的电 流作用下，DNA分子在凝胶中不断改变迁移方向。大 分子DNA转向缓慢，迁移速度落后于小分子DNA。 OFAGE电泳可分开百万 bp(Mb)级的DNA。 均一电场电泳仪 CHEF 均均 （ ）设计 了3对对称的正 一一 负极装置，电极