SrRNA分子生物学鉴定-中国工业微生物菌种保藏管理中心.PDF

维普资讯 糖化酶生产菌种 CICC2462的5．8SrRNA分子生物学鉴定 姚 粟 程 池 (中国食 品发酵_T业研究 院，北京，100027) 摘 要 CICC2462是我国酶制剂企业普遍采用的生产菌种 ，由于其不产孢子的特点，对该菌种的鉴定 目前尚无 定论。文中利用分子生物 学技术对该菌种进行鉴定：经茵丝体 DNA 提取、PCR扩增和序列测定，得到 ITS1— 5．8S-ITS2序列(约600bp)。利用BIOEDIT，TREEVIEW，CLUSTALX等序列分析软件对该序列进行处理和 分 析，并将序列提交NCBI(NationalCenterforBiotechnologyInformation)，进行核酸序列 同源性 比较 。经分析认 为 CICC2462为黑 曲霉变种(Aspergillusnigervar．)。 关键词 5．8SrRNA，PCR，NCBI 无孢型菌种 CICC2462是 目前我 国糖化酶生产 l 材料与方法 企业普遍采用的生产菌种 ，其发酵活力高，转苷酶活 力低，糖化效果极佳 ，被称为高转化率糖化酶生产菌 1．1 菌 种 种 。但到 目前为止，对该菌种鉴定工作还没有定论 ， CICC2462：无孢型糖化酶生产菌种 ，中国工业 国内几家权威菌种鉴定机构采用常规真菌鉴定方法 微生物菌种保藏中心保藏。 对其进行鉴定 ，出现了不同的结果 ：武汉大学中国典 1．2 培养基 型培养物保藏中心先后 2次的鉴定结果分别为肋状 淀粉培养基 ：牛肉膏 0．3％，蛋白胨 1％，酵母抽 拟膜孢酵母 (Saccharmycopsisfibuligera)和宛氏拟青 提物 0．2％，NaC10．2％，淀粉 2％，琼脂 1．7％， 霉 (Paecilomycesvarioii)，后来中国科学院微生物研 pH5．8。 究所菌种保藏 中心 曾鉴定该菌株为黑 曲霉 (As— 斜面培养基 ：经改 良的查氏培养基 ，pH5．8。 pergilliusniger)。由此可见 ，由于 CICC2462不产孢 半固体 培养基 ：经改 良的查 氏培养基 ，琼脂 子的特性，无法通过传统形态分类学进行准确 的鉴 0．5％ ，pH5．8。 定 [，。 1．3 试 剂 随着生物化学 、遗传学以及分子生物学等相关学 CHC13、异戊醇 、异丙醇、75％乙醇、酚等 ；CTAB： 科的发展，微生物的分类研究已逐步从过去依赖形态 Sigma公司；TaqDNA聚合酶 ：上海华美生物工程公 和生理生化等表型特征描述逐渐转向分子生物学鉴 司；dNTP：上海华美生物工程公司。 定方法。应用分子生物学方法从遗传进化角度 阐明 1．4 引 物 种群之间和种间内在的分类学关系已经成为 目前微 真菌通用引物 ]：ITS4和 ITS5引物对 ，由上海 生物分类学研究的热点 J。由于分子生物学技术具 华美生物工程公司合成 。 有操作简便 ，特异性高和准确性可靠等优点，rDNA ITS4：5’TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC 的序列测定等技术已被广泛应用于微生物菌种的鉴 3’ 定工作 中 J。对于真菌而言，5．8SrRNA序列进化 ITS5：5’ GGA AGT AAA AGT CGT AAC 缓慢而相对保守，而 ITS序列的进化则相对迅速 ， AAG G3’ 这使得 ITS1—5．8S—ITS2序列具有高度