孔雀石绿单克隆抗体制备和酶联免疫检测方法的建立-分析化学.PDF

第44卷 分析化学 (FENXI HUAXUE)摇 研究报告 第9期 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 2016年9月 ChineseJournal of Analytical Chemistry 1385~1393 DOI:10.11895/j.issn.0253鄄3820.160360 孔雀石绿单克隆抗体制备和酶联免疫检测方法的建立 1 2 2 1 *2 王 宇摇 杨金易摇 徐振林 摇 戚 平摇 沈玉栋 1 2 (广州市食品检验所,广州510410)摇 摇 (华南农业大学食品学院,广州510640) 摘摇 要摇 针对孔雀石绿三苯环特征结构,设计合成1种高质量半抗原。 通过偶联载体蛋白、动物免疫和细胞 融合,制备出一株高质量的单克隆抗体MG鄄DA4鄄C7,亚类为IgG1,轻链为 资型。通过对包被原浓度、抗体浓 度、二抗浓度的优化,建立了孔雀石绿间接竞争酶联免疫分析方法。 方法半抑制浓度(IC )为0.96 滋g/ L,线 50 2 性检测范围(IC ~C )为0.1~8.1 滋g/ L,LOD(IC )为0.05 滋g/ L,回归方程y=-0.3274lgx+0.4698(R = 20 80 10 0.9891)。本方法特异性高,与代谢物隐孔雀石绿交叉反应小于0.1%,与结晶紫、灿烂绿交叉反应率分别为 18.1%和26.5%;实际样品添加回收率为87.3% ~107.3%。本方法测定结果经HPLC鄄MS/ MS方法确证,二 者相关系数达0.999。 本方法可用于鱼类等水产品中孔雀石绿残留的实际检测。 关键词摇 孔雀石绿;半抗原;单克隆抗体;抗原识别;酶联免疫分析 1摇 引摇 言 孔雀石绿(Malachitegreen,MG,图1)是三苯甲烷类工业染料,从1933年起作为杀菌剂、防腐剂被广 [1,2] 泛用于预防与治疗水产动物养殖中的水霉病、鳃霉病和小瓜虫病等 。 但是,孔雀石绿及其代谢物隐 性孔雀石绿具有潜在“三致冶作用,可能对人类健康与环境造成危害[3~6]。 因此,美国、加拿大、欧盟等国 家都禁止在水产养殖中使用孔雀石绿,我国于2002年将孔雀石绿列入《食品动物禁用的兽药及其化合物 [7,8] 清单中》 。 然而,由于孔雀石绿杀菌、防腐效果好,且价格低廉,致使一些生产者受利益驱动在水产品养 [9,10] [11] 殖、运输及贮存中违规使用情况依然存在 。 因此,研究孔雀石绿快速检测方法显得尤为重要 。 [12,13] [14] 目前,检测孔雀石绿