抗菌药物筛选的试验方法与技术-中山大学化学与化学工程学院.PPT

综合化学实验-化学生物学专题实验 一个新的化合物或分离提取有效成分是否有抗菌作用，需要药理实验来证实，首先采用体外实验方法，观察试验物对细菌有无杀灭作用或抑制作用，体外实验的重要性在于方法简便，用药量少，短时间内能判断药物抗菌的广度和强度，为深入体外实验和体内药效研究提供数据。 体外实验是筛选抗菌药物或测试新药抗菌性能的重要环节。药物对细菌代谢的影响、可以使细胞呼吸量减低，或酶系统受到抑制等，因而出现细菌不生长或部分抑制，可借以判断药物对细菌有无抗菌作用，或抗菌范围。体外实验是细菌与药物直接接触，没有机体诸因素参与，故体外和体内实验的结果不一定完全一致，需两方面综合分析进行评价。 一、实验目的 二、微生物培养基的配制、灭菌与培养 （一）基本原理 正确掌握培养基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要基础。由于微生物种类及代谢类型的多样性，因而用于培养微生物培养基的种类也很多，它们的配方及配制方法虽各有差异。 但一般培养基的配制程序却大致相同，例如器皿的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，斜面与平板的制作以及接菌等基本环节大致相同。 （二）实验过程 平板的制作 三、微量稀释法体外抗菌实验 连续稀释法（试管稀释法）通常用于测定微生物的最小抑菌浓度（MIC），即将微生物的浓度按几何级数或数学级数进行递减稀释，然后将不同浓度的微生物混入含试验菌的液体培养基或固体培养基中，经培养后，能抑制试验菌生长的最低浓度，即为该微生物的最小抑菌浓度。 微量稀释法 此种方法常用于测定细菌对药物敏感性或新药对细菌的抗菌活性试验。一般应用96孔微量稀释板，孔底呈U型，每孔容量为0.20-0.30ml。本法操作较便，用培养基量少，可作大批量药敏试验。 (一）实验过程 筛选实验过程 96孔细胞培养板加样安排 试验用样品 环丙沙星 2?,4?,3-三羟基二苯甲酮 2,4,4?-三羟基二苯甲酮 2,4,2?-三羟基二苯甲酮 2,3,4,2?-四羟基二苯甲酮 2,3,4,3?-四羟基二苯甲酮 2,3,4,4?-四羟基二苯甲酮 2,4,2?,4?-四羟基二苯甲酮 2,3,4,2?,4?-五羟基二苯甲酮 丹皮酚 丹皮酚-镍（II）配合物 丹皮酚-氧钒（V）配合物 丹皮酚-铜（II）配合物 丹皮酚-钴（II）配合物 丹皮酚-锰（II）配合物 丹皮酚-锌（II）配合物 苯甲基-N-苯基亚胺 3-羟基苯甲基-N-苯基亚胺 4-羟基苯甲基-N-2,4-二甲氧基苯基亚胺 2-羟基苯甲基-N-3,5-二苯基亚胺 3,4-二羟基苯甲基-N-苯基亚胺 4-羟基苯甲基-N-3,4-二甲氧基苯基亚胺 23. 4-羟基-3-甲氧基-N-2,4-二甲氧基苯基亚胺 24. 苯甲基-N-4-羟基苯基亚胺 3,4-二羟基苯甲基-N-2,4-二甲氧基苯基亚胺 4-羟基苯甲基-N-4-羟基苯基亚胺 3,5-二羟基苯甲基-N-3,4-二甲氧基苯基亚胺 2,5-二羟基苯甲基-N-4-羟基苯基亚胺 2,4-二羟基苯甲基-N-4-羟基苯基亚胺 2,4-二羟基苯甲基-N-2,4-二甲氧基苯基亚胺 4-羟基苯甲基-N-3-羟基苯基亚胺 3,5-二羟基苯甲基-N-2,4-二甲氧基苯基亚胺 4-羟基-3-甲氧基-N-3,4-二甲氧基苯基亚胺 4-羟基苯甲基-N-4-甲基苯基亚胺 4-羟基-3-甲氧基苯甲基-N-4-甲基苯基亚胺 3,5-二羟基苯甲基-N-4-甲基苯基亚胺 2,4-二羟基苯甲基-N-4-甲基苯基亚胺 4-磺酸基-3?,4?-二羟基偶氮苯 4-磺酸基-2?,4?-二羟基偶氮苯 4-硝基-3?,4?-二羟基偶氮苯 4-硝基-2?,4?-二羟基偶氮苯 4-硝基-2?,5?-二羟基偶氮苯 4-溴-3?,4?-二羟基偶氮苯 对羟基苯甲酸甲酯 筛选数据分析 筛选数据分析 （4）最小抑菌浓度或EC50的测试 操作步骤与试管稀释法相似，一般常用MH培养基，根据