氨基酸aminoacid蛋白质的构件分子.PPT

蛋白质总结 氨基酸 蛋白质的共价结构和三维结构 蛋白质结构与功能的关系 蛋白质的分离、纯化和表征 重要实验 1.肌红蛋白 2.红蛋白 3.免疫球蛋白 4.辅基血红素（可与氧、一氧化碳、氢离子结合） 5.蛋白质结构与功能的关系：取决于以一级结构为基础的蛋白质的空间构象 a.一级结构与功能的关系 一级结构的变异与分子病（镰刀状细胞贫血病） 一级结构与生物进化（细胞色素） b.空间结构与生物功能 —— 蛋白质的变构现象（血红蛋白） 6.血红蛋白与肌红蛋白的比较 胶原蛋白（胶原）胶原蛋白类型：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、·····Ⅶ。属结构糖蛋白。 每股肽链为左手螺旋，多由Gly-Pro-Y序列重复而成，含三种不常见的氨基酸（5－羟赖氨酸、4－羟脯氨酸和3－羟脯氨酸） 肌球蛋白（掌握结构）由两条相同的重链和两对不同的轻链组成。头部有ATP结合位点（具ATP酶活性）和肌动蛋白结合位点。装配成骨骼肌的粗丝。 肌动蛋白：球状单体，组成骨骼肌的细丝 蛋白质的性质和分离、纯化　 1、蛋白质的酸碱性质 等电点 与它所含的酸碱氨基酸数目比例有关 等离子点 蛋白质的一个特征常数 2蛋白质的胶体性质 维持蛋白质胶体性质稳定的因素（3点） 3蛋白质沉淀的方法 等电点沉淀法（ 可逆、不变性) 盐析法 （可逆、不变性） 有机溶剂沉淀法（ 可逆或不可逆） 重金属盐沉淀法 （变性） 生物碱试剂 （变性） 加热沉淀法 （ 变性） 强酸碱沉淀（不可逆） 4蛋白质的变性与复性（温和条件、变性因素、常用变性剂） 6、蛋白质相对分子质量的测定　　 根据分子大小不同的方法 透析和超过滤 利用溶解度差别的纯化方法（实践最常用的方法a盐析b有机溶剂分级分离） 根据电荷不同的纯化方法 （PAGE、醋酸纤维素薄膜电泳、离子交换层析） 利用选择性吸附的纯化方法 利用对配体的特异生物学亲和层析: 一步处理即 亲和力的纯化方法可分离所需蛋白质，纯度很高 （一）蛋白质的含量测定 ①凯氏定氮法 ②双缩尿法 ③ Folin-酚试剂法 ④紫外吸收法 ⑤考马斯亮蓝结合法 灵敏度高，重复好 ⑥胶体金测定法 灵敏度最高 （二）蛋白质的纯度测定 电泳、沉降、HPLC和溶解度分析等。 蛋白质实验部分 氨基酸纸层析 考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子质量 氨基酸纸层析 重 点：氨基酸纸上层析法的操作技术 难 点：纸层析法的基本原理 相对迁移率 Rf = X/Y　　 考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度 重 点：考马斯亮蓝法定量测定蛋白质含量的原理和方法 实验原理 考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区相结合，这种结合具有高敏感性。考马斯亮蓝G250的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm。当它与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色，其最大吸收峰改变为595nm，考马斯亮蓝G250－蛋白质复合物的高消光效应导致了蛋白质定量测定的高敏度。 在一定范围内，考马斯亮蓝G250－蛋白质复合物呈色后，在595nm下，吸光度与蛋白质含量呈线性关系，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质的分子量及氨基酸成分无关，因此被广泛地应用。 Coomassie brilliant blue G-250 在一定的实验条件下，未知样品的溶液与标准蛋白质溶液同时反应，并于595nm下比色，可以通过标准蛋白质的标准曲线求出未知样品的蛋白质浓度。 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子质量 重点掌握：实验原理、整个实验过程的设计与操作，如标准蛋白质的选择、分离胶与浓缩胶浓度的确定与制备、灌胶、样品的处理、上样量及方法的选择。 电泳过程中有3种物理效应： 样品的浓度效应； 对被分离分子的筛选效应； 电荷效应。 迁移率大小： 分子大小 分子形状 净电荷（荷质比） 测定方法 用几种标准蛋白质相对分子质量的对数值对它们的迁移率作图。 测出待测样品的迁移率。 从标准曲线上查出样品的相对分子质量。 * * 生工081班 蛋白质的结构与相关功能 三维结构 辅基血红素（与氧结合部位） 氨基酸残基数 与氧结合 构象改变 与氧亲和力 与 氧结合曲线 肌红蛋白 一条多肽链 1个 153 Fe( II )原子以第六个配价键与氧进行可逆氧合作用 铁卟啉位移 　　呈圆顶状?平面状 大 血红蛋白 4个多肽亚基 4个 α2(141)β2(146) Fe( II )原子以第六个配价键与氧进行可逆氧合作用 去氧血红蛋白（T态）和氧合血红