第十三 十八节食品中有害物质的检测.ppt

2、速测卡符合率：在检出的30份以上阳性样品中，经气相色谱法验证，阳性结果的符合率应在80%以上。 3、葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇和番茄汁液中，含有对酶有影响的植物次生物质，容易产生假阳性。处理这类样品时，可采取整株（体）蔬菜浸提或采用表面测定法。对一些含叶绿素较高的蔬菜，也可采取整株（体）蔬菜浸提法，减少色素的干扰。 4、当温度条件低于37℃，酶反应速度随之放慢，药片加液后放置反应的时间也应相对延长，延长时间的确定，应以空白对照卡用手指（体温）捏3min时可以变蓝，即可往下操作。注意样品放置的时间应与空白对照卡放置的时间一致才有可比性。空白对照卡不变色的原因：一是药片表面缓冲溶液加得少、预反应后的药片表面不够湿润；二是温度太低。 5、红色药片与白色药片叠合反应的时间以3min为准，3 min后的蓝色会逐渐加深，24h后颜色会逐渐退去。 方法二 酶抑制率法（分光光度法） 实验原理： 根据有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制乙酰胆碱酯酶的活性原理，向蔬菜的提取液中加入生化反应底物碘化硫代乙酰胆碱和乙酰胆碱酯酶，如果蔬菜不含有机磷或氨基甲酸酯类农药残留或残留量低，酶的活性就不被抑制，加入的底物就能被酶水解，水解产物与加入的显色剂反应产生黄色物质。如果蔬菜的提取液含有农药并残留量较高时，酶的活性被抑制，底物就不被水解，当加入显色剂时就不显色或颜色变化很小。用分光光度计在412nm处或农药残毒快速检测仪测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，就可以判断蔬菜中含有机磷或氨基甲酸酯类农药残留量的情况。 试剂： 1、pH8.0缓冲液 11.9g无水磷酸氢二钾与3.2g磷酸二氢钾，溶解于1000 mL蒸馏水中。 2、乙酰胆碱酯酶 根据酶活力用缓冲溶液溶解，3 min的吸光值变化ΔA0值应控制在0.3以上。摇匀后在4℃冰箱中保存，保存期不超过4天。 3、底物 25.0 mg碘化硫代乙酰胆碱，用3.0 mL缓冲溶液溶解，4℃冰箱保存。保存期不超过2周。 4、显色剂 160 mg二硫代二硝基苯甲酸和15.6 mg碳酸氢钠，用20 mL缓冲溶液溶解，4℃冰箱保存。 5、可选用由以上试剂制备的试剂盒。乙酰胆碱酯酶的ΔA0值应控制在0.3以上。 分析步骤： 1、样品处理 选取有代表性的蔬菜样品，去掉不可食部分，冲洗掉表面泥土，剪成1 cm左右见方碎片。取样品1 g，放入烧杯或提取瓶中，加入5 mL缓冲液，振荡1～2 min，倒出提取液，静置3～5 min，待用。 2、对照溶液测试 先于试管中加入2.5 mL缓冲液，再加入0.1 mL酶液、0.1 mL显色剂。摇匀后于37 ℃放置15 min以上（每批样品的控制时间应一致）。加入0.1 mL底物摇匀，此时检液开始显色反应，应立即放入比色皿中，记录反应3 min的吸光度的变化值ΔA0。 3、样品溶液测试 先于试管中加入2.5 mL样品提取液，其他操作与对照测定相同，记录反应3 min的吸光度的变化值ΔAt。 结果计算： 结果判断： 当蔬菜样品提取液对酶的抑制率≥50% 时，表示样品中有高剂量的有机磷或氨基甲酸酯类农药残留，可判定样品为阳性结果，对检验结果阳性的样品需重复检验两次以上。 注意事项及说明 1、对检验结果阳性的样品，需用其他方法进一步确定残留农药的种类和进行定量测定。 2、酶抑制率法对部分农药的检出限为： 0.05 呋喃丹 3.0 乐果 0.2 敌百虫 4.0 马拉硫磷 0.05 丁硫克百威 2.0 甲胺磷 0.1 灭多威 0.3 辛硫磷 5.0 甲基异柳磷 1.0 对硫磷 0.8 氧化乐果 0.1 敌敌畏 检出限（mg/kg） 农药名称 检出限（mg/kg） 农药名称 3、葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇和番茄汁液中，含有对酶有影响的植物次生物质，容易产生假阳性，处理样品时，可采取整株（体）蔬菜浸提或采用表面测定法。对一些含叶绿素较高的蔬菜，也可采取整株（体）蔬菜浸提法，减少色素的干扰。 4、当温度条件低于37℃，酶反应速度随之放慢，药片加液后放置反应的时间也应相对延长，延长时间的确定，应以胆碱酯酶空白对照测试的吸光度变化 ΔA0在0.3以上为准。注意样品放置时间应与空白对照溶液放置时间一致才有可比性。酶的活性不够和温度太低都可能造成胆碱酯酶空白对照液3 min的吸光度ΔA0变化值＜0.3。 5、该法适用于大量蔬菜样本的筛检，不适用于最后的仲裁检测。 第三节 食品中霉菌毒素及其检测 食品中黄曲霉毒素B1的测定 GB/T 5009.22—2003 ? 黄曲霉毒素（AFT）是一组化学结构类似的化合物，根据其在365nm紫外光下呈现的荧光颜色可分为B、G两大类。根据Rf值不同