微生物学实验二摘要.ppt

细菌形态学检查、消毒灭菌 新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology 基础医学院微生物学教研室 王沛珍 Tel：0373-3029130 E-mail：wpz246@126.com 实验二 细菌形态学检查  消毒灭菌 一、细菌形态学检查 一、不染色标本检查(活体） 悬滴法 压滴法 二、染色标本检查 单染法：简单染色，一种染料（美蓝染色） 复染法：鉴别染色法，两种以上染料（革兰染色、抗酸染色） 形态学检查分类 1884年由丹麦细菌学家Gram创立。 革兰染色是最常用的一种染色方法，将 细菌初步分为革兰阳性菌和革兰阴性菌，在临床上具有非常重要的意义。 革兰染色(Gram stain) 一、目的 1.掌握革兰染色及细菌涂片的制备方法。 2.熟悉革兰染色的原理和临床意义。 二、原理 通透性学说 G+菌细胞壁结构致密，肽聚糖层厚且交联度高，脂质含量少，乙醇不易渗入。 G-菌细胞壁结构疏松，肽聚糖层薄且交联度低，含大量脂质，乙醇易渗入。 1.菌种：白色葡萄球菌 大肠杆菌 2.试剂： 革兰染色液 初染液 结晶紫 媒染液 卢戈氏碘液 脱色液 95%乙醇 复染液 稀释石碳酸复红 3.其它：接种环、载玻片、染色盘、酒精灯等 三、器材和试剂 冲洗 3.油镜观察实验结果 四、方法与步骤 1.细菌涂片的制备 涂片 干燥 固定 2.染色 初染（结晶紫） 媒染（卢戈氏碘液） 脱色 （95%乙醇） 复染（稀释石碳酸复红） 吸水纸吸干 1min 1min 30s 30s 冲洗 冲洗 冲洗 五、结果 一 一 半 半 结晶紫 卢戈氏碘液 95%乙醇 石碳酸复红 初染 媒染 脱色 复染 G+菌 G-菌 图一 图二 无菌操作（接种环灭菌和取菌）。 涂片的厚度要适中。 染色的时间控制，一一半半。 冲洗的方法，不要对着涂片区冲洗。 六、注意事项 七、意义 1.鉴别细菌 2.研究与致病性 的关系 3.指导临床用药 G+菌 G-菌 G+菌：外毒素 G-菌： 内毒素 G+菌：青霉素、头孢菌素等 G-菌：链霉素、庆大霉素等 细菌的特殊结构（示教） 鞭毛 荚膜 芽胞 注：油镜的使用方法 二、消毒灭菌 一、高压蒸汽灭菌法 完全杀灭细菌的繁殖体和芽胞 压力：103.4 KPa 温度: 121.3℃ 时间：15～20min ①加水至规定的水平面，放入物品，依次旋紧相对的紧固螺旋。 ②接通电源，开始加热，同时打开排气阀，使冷空气逸出。待冷空气全部排出后，关闭排气阀。 ③继续加热，压力表指在所需数字开始计时，调节热源，维持15～20min． ④停止加热，待压力表降至零时徐徐开放排气阀，排尽余气，打开锅盖取出灭菌物品。 1.使用方法 全自动高压蒸汽灭菌锅 锅内物品不应放置过挤。 注意排出冷空气，否则气压表上压力并非全部是蒸汽压力，不能保证灭菌效果。 灭菌后排气不能过急，以免容器内液体外溢或引起破裂。 不耐高热高压的物品，不能用此法。 2. 注意事项 紫外线杀菌作用强，而穿透能力弱。 紫外线中波长265-266nm的杀菌作用最强。 常用于手术室、无菌实验室、传染病房的空气消毒及不耐热物品表面消毒。 二、紫外线杀菌试验 1.方法：纸片及玻璃遮盖法 用密涂接种法将细菌涂布于普通琼脂平板上，取无菌滤纸片将平皿部分遮盖（或打开一半平皿盖），置于紫外灯下照射30min，拿开纸片，盖上皿盖，37℃倒置培养24h后取出观察结果。 滤纸片用后需要用火烧掉 2.密涂接种 分三次接种，每次取一环。第一次密涂接种后旋转60度二次密涂接种，然后同方向旋转60度后再次密涂接种。 1 2 3 4 1：肥皂洗手 2：2.5%碘酒擦拭手指 3：75%酒精擦拭手指 4：0.1%新洁尔灭擦拭手指 注意：“前和后”手指要对应 三、化学消毒剂对细菌的影响 实验报告的撰写 内容：革兰染色 一、目的