尿液维生素B2测定介绍.ppt

负荷尿中维生素B2测定 ——荧光分析法 维生素B2（核黄素） 黄色粉末状结晶体，水溶液呈现黄绿色荧光。 酸性及中性环境中对热稳定，碱性环境中易被热和紫外线破坏 代谢活性形式：黄素单核苷酸（FMN）， 黄素腺嘌呤二核苷酸辅酶（FAD） 生理功能： 1、 参与体内生物氧化与能量代谢 2 、参与维生素B6和烟酸的代谢 3、其他生化反应，药物代谢等。 * 维生素B2缺乏与过量 维生素B2缺乏： 口腔：口角炎，唇炎，舌炎，地图舌 皮肤：脂溢性皮炎 眼：对光有过度敏感的反应、视物模糊等 其他影响：干扰体内铁的吸收、贮存及动员 影响生长发育 一般核黄素不会引起过量中毒。 * 食物中维生素B2来源 * 实验目的 应用尿负荷试验评价人体维生素B2营养状况。 * 实验原理 代谢角度： --水溶性维生素，在机体内存留时间短，满足机体需求后，多余部分迅速从尿中排出。 --当日常摄入量达不到机体需要量时，摄入的维生素制剂将首先留在体内满足机体需要，从而尿中排出量较少，反之亦然。 因此，可由尿中排出的维生素量来判断体内水溶性维生素的水平。 * 方法角度 --荧光化合物，在一定波长的光波照射下发黄绿色荧光。 --荧光强度F与溶液浓度C成线性关系—— F=KC * 仪器与试剂 荧光光度计 酸性水：取浓硫酸0.3ml，加蒸馏水稀释至200ml; 核黄素储备液(已配好)：50μg/ml。酸性水配制，棕色瓶低温保存 核黄素标准应用液：1μg/ml。吸取核黄素储备液2ml，用酸性水稀释至100ml，棕色瓶低温保存，现用现配； 低亚硫酸钠（荧光熄灭剂） * 实验步骤 1 收集负荷尿 清晨排空小便后，空腹口服维生素B25mg，根据季节饮水200-500ml，收集服药后4h内所有尿液，并在瓶中加入1g左右草酸，使尿液保持在PH3-5，防止维生素B2降解，必要时还可加甲苯防腐。用量筒量取总尿液量并记录，做好标记后4℃短期保存，-20℃长期保存。 2 测定前读取尿液PH值，确保PH=3～5 3 负荷尿维生素B2测定 * 负荷尿维生素B2的测定 　　 　　　　　　　　　　　　　　　标准管　　　　样品管 尿样(ml) 　　　 1 　　 1 B2标准应用液(ml) 　 1.5 　　 0 酸性水(ml) 　　　 7.5 　 　 9 混匀 荧光光度计读值（420、530nm） C 　 A 低亚硫酸钠 　　　 1平匙 1平匙 混匀 背景荧光值（420、530nm） D 　 B * 实验计算及结果 　　　　　　　　　　　　　A-B 总尿量(ml) 尿中核黄素含量（μg）= [(C-D)-(A-B)] ×内标核黄素量（μg）× 分析用尿量(ml) F=KC ﹦〉C=F/K, K=F/C ﹦〉 K= [(C-D)-(A-B)]∕内标核黄素量 缺乏 （μg） 不足 （μg） 正常 （μg） 充裕 （μg） ＜400 400 ～ 799 800 ～ 1300 1300 * 注意事项 避光操作，酸性体系，迅速操作； 低亚硫酸钠不能加入过多，否则影响吸光值，加入后必需立即读数，否则维生素B２又会被空气氧化成荧光型； 拿比色皿侧棱，并保证比色皿四面清洁； 注意标准品的配制及保存； 作业提交： 公共卫生学 院620办公室