2010省科技脑血管标书 2-22.doc

摘要 缺血性脑卒中是威胁人类健康的主要疾病，是人口死亡的主要原因之一，目前已经公认该疾病同时受遗传和获得因素的影响，而对获得因素的控制可以延缓或逆转疾病的发生和发展。缺血性脑卒中的发生涉及动脉粥样硬化和血栓形成，而与此相关的三个基因位点亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）、低密度脂蛋白受体（LDLR）和血栓调节蛋白（TM）的表达水平与这两个过程密切相关，这些基因的突变已被证实与缺血性脑卒中相关。DNA 甲基化修饰是一种使DNA 发生化学修饰、无基因序列改变、但可遗传、可逆的表观遗传修饰方式，是表观遗传学的重要研究内容之一，表观遗传是环境因素和细胞内的遗传物质之间发生交互作用的结果。过去研究发现基因启动子区甲基化修饰的改变会影响到基因的表达水平，从而导致疾病发生，然而缺血性脑卒中相关基因启动子区甲基化修饰状况改变是否与缺血性脑卒中形成的相关，目前未见报道。故本研究拟采用病例对照研究的方法，利用基因测序技术、甲基化敏感单链构象分析法（MS-SSCA 方法）和SIRPH 分析技术对这三个基因启动子区的甲基化修饰状况与缺血性脑卒中的关系进行研究。研究成果将有助于缺血性脑卒中的早期干预，及寻找新的治疗靶点，为深入研究缺血性脑卒中的发病机制、临床诊断提供新的视角。 四、主要研究开发内容和要达到的主要技术、经济指标以及将提供的研究开发成果及形式 1、主要研究开发内容： 1．缺血性脑卒中患者特定基因甲基化修饰状况的检测：以病例对照研究的方法，使用基因测序方法、甲基化敏感单链构象分析法（MS-SSCA 方法）和SIRPH 分析技术，并与同步检测的高血压组和正常对照组比较，测定启动子区的甲基化修饰水平，比较三种方法的可行性和有效性。 2．分析三种基因的表达水平，分析动脉粥样硬化相关基因亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）、低密度脂蛋白受体（LDLR）和凝血相关基因血栓调节蛋白（TM）启动子区的甲基化修饰程度与缺血性脑卒中的相关性。 3．综合启动子区甲基化水平与基因表达水平及患者的临床表现，开发出一套较为完善的分子诊断方法。 2、要达到的主要技术、经济指标： 1.完成动脉粥样硬化相关基因亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）、低密度脂蛋白受体（LDLR）和凝血相关基因血栓调节蛋白（TM）启动子区的甲基化修饰程度与缺血性脑卒中的关系研究，通过该研究获得缺血性脑卒中分子诊断的新位点和治疗的新靶点，以便使更多患者获得早期诊断和有效救治，而且能填补我国这方面的研究空白。 2.使用基因测序方法、甲基化敏感单链构象分析法（MS-SSCA 方法）和SIRPH 分析技术测定该研究基因启动子区甲基化修饰水平，比较三种方法的可行性和有效性。 3.对缺血性脑卒中的早期诊断和治疗将有助于减少我国缺血性脑卒中的致死率和致残率，减少国家和个人的医疗费用。 3、将提供的研究开发成果及形式： 1．预期可获得我国缺血性脑卒中相关基因甲基化修饰状况，以及缺血性脑卒中与MTHFR、LDLR和TM基因DNA 甲基化修饰的关系，并为缺血性脑卒中的基因诊断和治疗提供新方向。 2．使用基因测序方法、甲基化敏感单链构象分析法（MS-SSCA 方法）和SIRPH 分析技术测定启动子区的甲基化修饰水平，比较三种方法的可行性和有效性。 3．成果以论文形式在国家核心刊物上发表2－5 篇。 一、立项依据 (一)目的和意义 本研究从表观遗传学角度，拟采用病例对照研究的方法，利用基因测序技术、甲基化敏感单链构象分析法（MS-SSCA 方法）和SIRPH 分析技术，对缺血性脑卒中与动脉粥样硬化和血栓形成这两个病理过程中所涉及的三个相关基因：亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）、低密度脂蛋白受体（LDLR）和血栓调节蛋白（TM）进行研究，观察其编码基因启动子区DNA 甲基化的修饰状况，并探讨其与缺血性脑卒中的相关性，成果将有助于缺血性脑卒中的早期干预，及寻找新的治疗靶点，本项目将为深入研究缺血性脑卒中的发病机制、临床诊断打下基础。 (二)国内外概况 目前脑血管病已成为我国城市和农村人口的第一位致残和死亡原因，且发病有逐年增加的趋势，我国每年有150万~200万新发脑卒中病例，其中缺血性脑卒中占全部脑卒中的60%~80%，随着人口老年化和经济水平的快速发展及生活方式的变化，缺血性脑卒中发病率明显上升，提示以动脉粥样硬化为基础的缺血性脑血管病（包括短暂性脑缺血发作，TIA）发病率正在增长。全国脑卒中患者直接医疗费用支出年年递增与医疗支出日益增长相对应的是脑卒中发病率不但未降，反而以每年的速度递增。Hcy）血症是导致动脉粥样硬化(AS) 的危险诱发因素，并增加了脑卒中发生的风险[1、2]。其致As的机制包括损伤血管内皮细胞、促进平滑肌细胞增殖、导致氧化应激、激活炎症过程等[2]。同时血中高半胱氨酸水平还会引起血液的高凝状态和增加