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干细胞技术支撑平台简介 中国科学院生物化学与细胞生物学研究所干细胞技术平台(Stem Cell Platform)成立于2007年1月。主管机构为中科院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所。干细胞技术平台旨在提供干细胞培养和研究相关的资源材料和技术，促进我国干细胞研究的发展。 我们的任务 为致力于干细胞研究的科研工作者提供资源材料和专业技术支持与相关单位合作促进干细胞在基础生物学研究、药物研发、临床应用等领域的发展加强干细胞研究领域的国内外交流我们的服务 ★ 饲养层细胞、小鼠胚胎干细胞和人胚胎干细胞 ★ 不同分化条件、不同分化阶段的细胞或细胞裂解物 ★ 饲养层细胞制备、小鼠和人胚胎干细胞培养相关技术培训★ 小鼠胚胎干细胞★ 饲养层细胞小鼠胚胎干细胞、人胚胎干细胞培养相关试剂 ★ 小鼠胚胎干细胞、人胚胎干细胞全能性鉴定的全套一抗、二抗试剂盒 ★ 小鼠胚胎干细胞培养、自主分化用的各类生长因子 ★ 小鼠胚胎干细胞三胚层分化的全套免疫荧光染色Marker试剂盒 ★ 支原体检测服务及检测试剂盒★ 小鼠胚胎干细胞电转 ★ 普通细胞电转 ★ 内毒素检测 ★ 开展发育生物学及干细胞研究前沿的相关讲座 ★ 项目合作 我们的 负 责 人 丁小燕研究员，博士生导师 工作人员 刘敏英 徐兰 周桢宁 杨 科 吕 岳 徐 鹏 董 娟 联系我们 联系人：董 娟 中国科学院上海生命科学研究院 生化细胞所干细胞技术支撑平台 上海市岳阳路320号老生化大楼（41号楼）Stem Cell Support Platform Institute of Biochemistry and Cell Biology Shanghai Institute for Biological Sciences Chinese Academy of Sciences Room 733, Old Biology Building, No.320 Yueyang Road, Shanghai 200031, P.R. China Tel: +86-21Fax: +86-21E-mail: dongjuan@ W： /cp13-2.asp 学 员 须 知 提前半小时打开洁净室风机、层流罩风机和紫外灯。 进入操作室前按规定换鞋，穿好反穿衣，带上帽子、口罩、手套。 进出洁净室时，必须先关闭前一扇门再开另一扇门，以此类推。 每次进出洁净室请在表格上做好登记，包括时间、所用的耗材、领用的培养液、试剂和细胞。 最后离开操作室的人员请熄灭酒精灯，关闭层流台风机，打开紫外灯，关闭显微镜电源，关掉照明灯。 学员轮流值周做清洁工作。 发生仪器故障或有任何疑问请及时联系管理员。 9. 具体安排及注意事项见细胞房内张贴的通知。 培训指导人员 徐兰 720室 电 饲养层细胞制备 小鼠胚胎成纤维细胞制备取得小鼠胚胎 性成熟母小鼠与种公鼠按1公（♂）:2母（♀）比例合笼。 每天早上观察母小鼠阴道口。有乳白色或蛋黄色冻胶状物(阴道栓)即确定为怀孕。见栓当天上午定为怀孕的0.5d。 取怀孕12.5～14.5d母鼠,断颈处死，无菌条件下暴露子宫。 用镊子提起近子宫颈端,分离子宫系膜,剪断子宫角。 取出整个子宫,置于有PBS的平皿内。用PBS洗涤三次,弃除表面残余血迹。 沿子宫系膜侧剪开子宫,取出带有胎膜的胚胎,置于另一盛有PBS的平皿内,充分洗涤,弃除表面红细胞。 用小镊子撕破胎膜,取出胎鼠,弃除胎膜,用PBS洗涤三次。 去除胚胎头部、内脏和四肢，将躯干部置于另一盛有PBS的平皿内,用PBS至少洗涤三次,充分弃除红细胞。 取得小鼠胚胎成纤维细胞（MEF） 用无菌眼科小剪刀或刮胡刀片将鼠胚躯干剪(切)成1mm3以下的碎块, 吸置于离心管内。 加适量胰酶，将离心管置于培养箱中10-20分钟 取出离心管，反复吹打，加足量培养液终止消化 离心1000转，5分钟 弃掉上清，加适量培养液，反复吹打20次 分装到T75中，一般每2个胚胎可以制成一个T75的原代细胞 置37℃、5%CO2、饱和湿度培养箱培养 待细胞长3-7天细胞互相重叠爬满整个培养瓶底时即可1：3-1：6传代 吸弃培养液上清 PBS（不含钙镁）冲洗两次 加0.25%胰酶-0.02EDT消化 在显微镜下观察，当少量细胞漂浮，贴壁的细胞层出现裂隙时，用移液管吹打冲洗瓶底5-6次