丝素材料组织工程角膜.doc

注意邮编 ·实验研究· 物理交联再生丝素膜组织工程角膜生物相容性研究 张晓峰 刘铁连 杨吉成 夏蔚 钟蕾 孙正太 王英明 夏静【摘要】 背景 目的 研究采用物理交联再生丝素膜构建组织工程角膜的可行性。 方法 用常规培养法培养人角膜上皮细胞（CECs），将对数生长期的CECs在用家蚕丝制备的物理交联再生丝素膜上进行培养，分别于培养后24、48、72 h在倒置显微镜、扫描电镜下观察CECs的生长状态和形态学并与细胞培养板培养的人CECs形态进行对照。MTT法每日检测和记录再生丝素膜培养后人CECs的增生情况，流式细胞仪检测再生丝素膜培养人CECs的细胞周期和凋亡率。将再生丝素膜4 mm×3 mm植入新西兰白兔右眼角膜基质层间，于术后1、2个月时裂隙灯下对手术眼眼表进行检查，术后2个月摘除兔眼并制备移植眼角膜组织切片行组织病理学检查，观察再生丝素膜材料的降解情况及角膜新生血管的生长情况。采用免疫组织化学染色法检测术后1、2个月CD34在移植眼角膜组织中的表达并与正常眼进行对照。 结果 在24、48、72 h 3个时间点，倒置显微镜、扫描电镜再生丝素膜培养的人CECs与细胞培养板培养法培养的人CECs形态结构无明显差别。再生丝素膜细胞培养板培养CECs在1、2、3、4、5、6、7 d 各个时间点A490值差异无统计学意义（F=P(0.05）。再生丝素膜组和细胞培养板培养的CECs凋亡率分别为1.8、2.0细胞G2G1期分别为 1.956、1.945。再生丝素膜角膜植入后2个月时，再生丝素膜为排列整齐胶原组织替代，角膜内新生血管。角膜免疫组织化学检测显示再生丝素膜植入角膜后1个月、2个月CD34表达量均明显低于Ad-VEGF165诱导的阳性对照片，而与正常的角膜相比差异无统计学意义（P0.05）。术后1个月与术后2个月比较，角膜中CD34阳性率的差异无统计学意义（P0.05）。 结论 物理交联再生丝素膜构建组织工程角膜可行，再生丝素膜与角膜组织生物相容性良好，再生丝素膜植入兔角膜基质后无明显的炎症反应和新生血管。 【关键词】 丝素膜/物理交联再生； 角膜； 组织工程； 生物相容性；角膜上皮细胞；角膜移植号 R772.2 Q81Biocompatibility of physico-crosslinked regenerated silk fibroin film as tissue engineered cornea ZHANG Xiao-feng，LIU ie-lian，YANG i-cheng，XIA ei，ZHONG ei，SUN heng-tai，WANG ing-ming，XIA ing. Department of Ophthalmology，Affiliated First HospitalSoochow University，Suzhou 215006，ChinaZHANG Xiao-feng，Email:zhanglasik@ [Abstract] Background Biomaterials for corneal tissue engineering must demonstrate several critical features for potential utility in vivo, including transparency, mechanical integrity, biocompatibility and slow biodegradation. Silk ?lm biomaterial had been characterized to meet these functional requirements. Objective This study was to investigate the feasibility of physico-crosslink regenerated silk fibroin film as tissue engineered corneal scaffold. Methods Human corneal epithelial cells (CECs) links were cultured by regular method and CECs in logarithmic phase were than incubated on physico-crosslink regenerated silk fibroin film membrane. The shape of cultured human CECs was observed afte