分子生物学习题答案_070611.doc

分子生物学复习题 注意：请参照历年题型复习（有判断、填空、名词解释、看图、问答等） 第二章 DNA的复制与修复 1. 名词解释： ⑴origin：DNA复制是从DNA分子上特定位置开始，此位置称复制起点，是DNA复制所必需的一段特殊的DNA序列。 ⑵复制叉：DNA正在复制的分叉部位称为复制叉（replication fork） ⑶复制眼：复制的DNA（尤其是双向复制）在电镜下象只眼睛称复制眼（泡） ⑷复制子：基因组中具有一个复制起点和一个复制终点并能在细胞中自主复制的单位。 ⑸滚筒式复制：一种单向复制的特殊方式，一般是环状单链分子在复制过程中先形成共价闭环的双链分子（复制型），然后其正链在特定位置切开，游离出一个3-OH末端，然后在DNA聚合酶催化下，以环状负链为模板从正链3-OH末端加入脱氧核苷酸使链不断延长，通过滚动而合成出新的正链。 ⑹D-型：一种单向复制的特殊方式，双链在固定点解开进行复制，但两条链的合成高度不对称，一条链先复制，另一条保持单链而被取代，在电镜下看呈D-环型。待一条链复制到一定程度露出另一条链的复制起点，另一条链才开始复制。 ⑺θ式复制：环状DNA的一种双向复制方式，双链从起点处解开并双向复制，呈θ型状，直到复制终点。 ⑻端粒：真核生物线性染色体的两个末端具有的特殊结构，由许多成串短的重复序列组成。 ⑼SOS修复：DNA受到严重损伤，细胞处于危急状态时所诱导的一种DNA修复方式。修复结果只是能维持基因组完整性，但留下的错误较多，又称为错误倾向修复，使细胞有较高的突变率。 2．名词对比 ⑴引物酶和引发体：引物酶即DnaG，是负责DNA复制起始阶段RNA引物合成的酶；引发体指由DnaB解螺旋酶和DnaG引物合成酶构成了复制体的一个基本功能单位。 ⑵DNApolⅢ和DNApolⅠ：DNApolⅢ是由多个亚基组成的蛋白质，真正负责从新合成DNA的复制酶；DNApolⅠ是一个多功能酶，兼有聚合酶﹑3′-5′﹑ 5′-3′核酸外切酶的活性，主要起修复酶作用。 (3)DNA复制的先导链和随从链：DNA复制时以3′-5′链为模板连续合成的子链；而以5′-3′链为模板的不连续合成的子链为随后链。 3.简述同位素标记、密度梯度离心技术在分子生物学研究中的应用 ⑴15N-标记研究DNA的半保留复制：把细菌放在含15NH4Cl的培养液中培养若干代，分离出的DNA是含15N的“重”DNA，密度比一般含14N的DNA高。用密度梯度离心法，15N-DNA形成的致密带位于普通14N-DNA所形成的致密带的下方。 把含15N－DNA的细菌放回含普通的NH4Cl培养液中培养。细菌在营养条件充足时，20分钟就可以生长成新一代。提取子一代的DNA再作密度梯度离心分析，发现其致密带介于重带与普通带之间，看不到有单独的重带或普通DNA带。 实验结果说明：子一代DNA双链中有一股是15N单链，而另一股是14N单链。前者是从亲代接受和保留下来的，后者则是完全新合成的。密度梯度离心实验，完全支持半保留复制的设想。 含15N-DNA的细菌在普通培养液中继续培育出子二代，其DNA则是中等密度的DNA与普通DNA各占一半这也进一步证明复制是采取半保留式的。实验还可按子3代、子4代……进行下去，15N－DNA则按1／8、1／16…¨的几何级数逐渐被“稀释”掉。 ?⑵3H-标记研究DNA的半不连续复制，即连接酶突变核酸序列特点研究等：用3H脉冲标记大肠杆菌培养物，优先标记的是新合成的DNA。新合成的大多数是一些含有1000核苷酸的短片段，若再将菌放到不带3H的培养基中保温，发现3H出现在大片断中了。若用DNA连接酶突变的菌株作以上测试，3H一直出现在小片段中，说明DNA的复制是不连续的。 4．举例说明染色体外遗传元件的不同复制机制（θ型、D型、滚筒型） 有些病毒（如腺病毒、Φ29噬菌体等）及线粒体DNA的复制是单向进行的，滚筒式属单向复制。质粒整合前为θ式或滚筒式复制，整合后为一个复制子，质粒为双向复制θ式。真核细胞内线粒体DNA的复制方式为D-环复制（D-loop复制）形式。D-环复制特点是两条链的不同步复制。详见名词解释。 5．通过什么实验证明DNApol III合成DNA冈崎片段是以RNA为引物。 以а-32p-NTP标记+未标记dNTP为底物，引发合成后用稀碱处理，水解DNA和RNA的连接处，使RNA上的32p转移到了DNA上，证明RNA为引物。 6．生物体内哪些机制保证了DNA复制的保真性. DNA聚合酶的校对作用；RNA引物起始复制可减少复制错误；修复系统有多种机制和酶。 7．简要说明沉默突变、致死突变、渗漏突变、进化突变的原因 ⑴沉默突变：主要因为密码子的简并性，点突变不引起氨基酸的变化；或者个别氨基酸改变为结构和性质相似的氨基酸，则不影响表