CRMP-1真核表达载体的构建及其突起生长抑制作用.pdfVIP

PI Ll,：豢筹毛…洳 WWW．pibb．ac．on CRMP．1真核表达载体的构建 及其突起生长抑制作用· 林z)” 郭国庆t)”辛莉·’邱小忠2)沈伟哉-’原 (1)暨南大学医学院解剖学教研室。广州510630：哺方医科大学临床解剖学研究所，广东省组织构建与检测重点实验室，广州510515) mediator response 摘要为研究坍塌反应调节蛋白．1(collapsin 真核表达载体，以神经生长因子(NGF)诱导的PCI2细胞为模型，采用基因转染、突起生长时差成像、突起提取和免疫印迹 入细胞．过表达CRMP．1可明显抑制突起生长，促进突起坍塌，首先是细小突起缩短，然后是长突起，细胞突起的长度随 的细胞突起明显减少(PO．oi)．说明CRIVlP．1具有明显的突起生长抑制作用． 关键词坍塌反应调节蛋白，神经元，突起，生长，基因转染，基因表达 学科分类号Q189，Q954．67，R329．2 DOI：10．3724／SP．J．1206．2008．00504 mediator 坍塌反应调节蛋白(collapsinresponse 用，本实验构建CRMP．1的真核表达载体，并用 神经生长因子(NGF)诱导PCI2细胞分化为神经元 proteins，CRMPs)在神经系统中丰富表达，尤其是 发育阶段的神经组织，并作为RhoGTPases的下游样细胞，脂质体转染后通过绿色荧光蛋白示踪观察 信号和作用底物，介导突起生长和坍塌，其靶向结 CIm伊．1的突起生长抑制作用． 构是细胞骨架蛋白，如微管、肌动蛋白，通过细胞 1材料与方法 骨架的聚合和解聚参与突起生长的调控，以调控神 1．1材料 经元的生长行为【1~3】．CRMP．1是CRMPs家族成员 之一，1996年被克隆并鉴定，CRMP．1可与1．1．1菌株和质粒．EcDli cellsDH5a Competent 购自TaKaRa公司；PGEM—T Sema3A的受体PlexinA1组成复合体改变COS7 Easy克隆载体购自 1I-N表达载体购自 细胞的形态【4】，其突变体减弱Sema3A诱导的背根 Invitrogen公司；plLrGFP 神经节细胞轴突的排斥作用【习．CRMP-l沿着细胞Stratagene公司． DNA laddermarker，EcoR 内微管进行分布，参与突起生长、细胞变形和肿瘤 1．1．2试剂．250 I限制 侵袭迁移过程雅7】．突起生长是神经元发育过程中 性内切酶，MiniBESTPlasmidPurificationKit2．0， PCRKit DNA聚合酶，RNA 的重要事件，也是神经网络形成和建立的必需结 Taq 构，突起的坍塌以及由此造成神经元之间突触联系 自TaKaRa公司；T4