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一种新型抗HIV-1药物筛选方法的建立.pdf
·328
·论著·
一种新型抗HIV一1药物筛选方法的建立
冯婷婷 胡华秦爱兰 孙蔚吴南屏甘建和
【摘要】 目的用细胞共培养和流式细胞仪检测建立新型抗HIV-1药物筛选方法,并判断这种
方法在筛选抗HIV-1药物中的应用前景。方法把JLTRG细胞和H9/HTLV一11IB细胞按照不同比例
共培养24,48,72和96h。在荧光显微镜下观察细胞绿色荧光强度和密度,同时用流式细胞仪测定绿
色荧光的表达,并确定培养体系中最佳细胞比例和培养时间。通过选出的最佳条件结合药物半衰期
检测恩夫韦肽(T20)和依非韦伦(EFV)的有效性及药物半数抑制量(IC50)。采用HIV-1P24抗原荧
光定量PCR法检测病毒载量,并采用Spearman秩相关性分析法判断其与药物浓度及平均荧光强度之
间的相关性。结果实验结果显示,JLTRG细胞与H9/HTLV-11IB细胞按照10:1的细胞数量比例共
培养72h为最佳培养比例和时间。以T20和EFV对共培养体系进行验证,结果显示随着q20和EFV
浓度的改变,共培养体系中JLTRG细胞感染HIV一1的程度不同,其IC50分别为10nmol/L和
5nmol/L。T20和EFV药物浓度与平均荧光强度以及病毒载量呈负相关(r=一1,一0.986和一1,
一1,P0.叭);平均荧光强度与病毒载量呈正相关(r=0.986和1,P0.01)。结论本研究建立的
新型抗HIV一1药物筛选方法具有耗时短、操作方便等优点,可为抗HIV一1药物的筛选提供新的选择。
【关键词】 抗HIV药;药物筛选试验;流式细胞术;逆转录聚合酶链反应;半数抑制浓度
Establishmentofanew methodforanti-HIV-l Ailan,
screening drugsFengTingting+,HuHua,Qin
Sun First
Wei,Wu ofInfectiousDiseases,theAffiliatedHospitalof
Nanping,CanJianhe.+Department
Soochow
University,Suzhou215006,China
author:Wu
CorrespondingNanping,Entail:flwnp2013@163.con;CanJianhe,Email:ganjianhe@gmail.
Com
Toestablishandassessa new methodforanti—HIV—l
【Abstract】Objective screening drugs.
Methods cellswereCO—culturedwithdifierent ofH9/HTLV.IIIBcellsfor
JLTRG proportions 24,48,72
wereobservedfluorescence
and96 and of fluorescent under
green protein microscope,
h.Intensitydensity
andweretested flow ofcellsinCO—culture andtheculture
using cytometry.Theoptimalproportion system
timeweredetermined.Theeffectivenessof theirhalfmaximal
E
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