接种待测培养基-试验室能力验证管理系统.PPT

培养基和试剂质量控制方法GB 4789.28-201X;主要内容;1、培养基简介;1、培养基简介;1、培养基简介;1、培养基简介;;1.2.4 按制备方法分类 即用型培养基：以即用形式或融化后即用形式置于容器内供应的液体、半固体和固体培养基 脱水合成培养基：使用前需加水和进行处理的干燥培养基 自制培养基：依据完整配方的具体成份配制的培养基 ;2、培养基质量保证;2、培养基质量保证;2.2脱水合成培养基——制备注意事项 概述：严格按照厂商提供的使用说明配置。 水：实验用水的电导率在25℃时不应超过25μS/cm，相当于电阻率≥0.4M?cm。 微生物污染≤103/mL，最好在102/mL以下；定期检查实验用水是否受到微生物污染。;2、培养基质量保证;2、培养基质量保证;2.3脱水合成培养基——使用注意事项 灭菌或复溶后培养基放入47℃-50℃的恒温水浴锅中，冷却保温，直至使用； 培养基只可复融一次，融化后的培养基应尽快使用，放置时间不应超过4小时，未使用完的培养基不能重新凝固留待下次使用。 个别培养基使用前需要脱氧：松开容器盖子，沸水浴或蒸气浴中加热15min，盖紧盖子，迅速冷却，如 FT培养基。;2、培养基质量保证;2、培养基质量保证;ATCC菌株（进口）;2、培养基质量保证;获得标准菌株;标准储备菌株;3、培养基质量要求;质构仪;3、培养基质量要求;4、培养基性能测试方法;4、培养基性能测试方法; 将适当稀释度的目标菌0.1mL分别涂布于待测培养基平板和参考培养基平板（可用螺旋平板法或倾注法），经培养后，计算PR。 PR = NS/NO PR：生长率； NS ：待测培养基平板上得到的菌落总数； NO ：参考培养基平板上获得的菌落总数，应≥100CFU。 结果解释： 非选择性培养基和选择性计数培养基上目标菌的生长率应不小于0.7； 选择性分离培养基上目标菌的生长一般不小于0.5，最低应为0.1。;例：木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂（XLD） 测试菌株：鼠伤寒沙门氏菌，福氏志贺氏菌； 10倍稀释，选取适宜稀释度0.1mL涂布XLD平板和TSA参比平板，36℃±1℃培养 18h~24h； 计数： ; 待测培养基分装试管，10mL/支（或5mL/支）； 目标菌浓度选择：100CFU~1000CFU； 接种后，混匀： 立即吸取1mL，用相应培养基倾注平板； 剩余已接菌的待测培养基置20℃~25℃放置45min，再吸取1mL用相应培养基倾注平板； 分别按标准方法中规定的培养条件培养后，计数； 结果观察与解释： 待测培养基中的菌落数变化应在±50%内。 ;制备106~108CFU/mL 的工作菌悬液； 用1μL接种环划线平板，A区用按0.5cm的间隔划四条平行线，按同样方法在B、C区划线，最后在D区划一条连续曲线； 培养后，评价菌落的形状、大小和生长密度，计算生长指数G； 每条有菌生长的划线记为1分，如果仅一半的线有菌生长，记为0.5分，没有生长或生长量少于划线一半的，记为0分； 结果解释： 目标菌在培养基上应呈典型的生长，目标菌生长指数G大于6，培养基可接受；非选择培养基的G值通常较高。;非目标菌半定量测试方法 用1μL接种环划线平板，划六条平行直线； 每条有菌生长的划线记为1分，如果仅一半的线有菌生长，记为0.5分，没有生长或生长量少于划线一半的，记为0分； 结果解释 非目标菌的生长应部分或完全被抑制。 ;培养基分装，10mL/支； 新鲜菌液10倍稀释后，选取10CFU~100CFU稀释度工作菌悬液； 取1mL工作菌悬液接入待测培养基； 同时取1mL倾注平板，做接种量计数用； 按标准方法中的培养时间和温度进行培养（如增菌时间为8h以下，取10μL增菌液倾注平板，再按适合的时间和温度培养，结果按附录F判定）； 结果解释： 0 表示无混浊； 1 表示很轻微的混浊； 2 表示严重的混浊 目标菌的浊度值应为2. ;4、培养基性能测试方法;混合菌接种： 同时分别将目标菌菌悬液（与待测培养基接种同一稀释度）和非目标菌菌悬液（比待测培养基接种小10~100倍稀释度）1mL倾注平板，用作接种量计数 非目标菌接种：在待测培养基中接种等量混合菌试管中的非目标菌。 培养液接种： 混合菌培养液接种：用10μL接种环取1环培养后的混合菌培养液，划线接种到特定的选择性平板上； 非目标菌培养液接种：吸取10μL培养后的非目标菌培养液，涂布到非选择性平板上； 计算和结果解释 目标菌在选择性平板上的菌落应?10CFU 非目标菌在非选择性平板上的菌