五分类血球仪检测原理解析.doc

MEK7222/8222 白细胞分类的测定原理 MEK-7222/8222，计数原理是wbc/rbc/plt电阻法，分类是使白细胞通过鞘流进入鞘流池内，然后通过检测对白细胞照射时发生的散射光，对白细胞进行分类。 这些散射光，根据血细胞的容积、血细胞的复杂性（有无颗粒、核的构造等）的不同，光的强度和方向有所不同，因此，通过以激光直进方向和同方向小角度的散射光（以下称为Size）、激光直进方向和同方向大角度的散射光（以下成为Complexity）、与激光直进方向相对垂直的方向的散射光（以下称为Granularity）为参数的散点图，可以对淋巴细胞、单核细胞、嗜中性白细胞、嗜酸性白细胞、嗜碱性白细胞进行分类。另外，Size表示血细胞的大小、Complexity表示血细胞的复杂度、Granularity表示血细胞的颗粒的程度。  这种方法提供了三个散射图，MAIN散点图 NE-EO散点图 MO-BA散点图 Neutrophil Count(嗜中性白细胞) NEC Lymphocyto Count（淋巴细胞） LYC Monocyto Count（单核细胞） MOC Eosinophil Count（嗜酸性白细胞） EOC Basophil Count（嗜碱性白细胞） BAC 散点图有下列三种。纵轴是Size、横轴是Complexity的散点图（以下称为S-C散点图）；纵轴是Size、横轴是Granularity的单核细胞/嗜碱性白细胞分类用散点图（以下称为MO-BA分类用散点图）；纵轴是Size、横轴是Granularity的嗜中性白细胞/嗜酸性白细胞分类用散点图（以下称为NE-EO分类用散点图）。 淋巴细胞分布在S-C散点图的LY区域。单核细胞及嗜碱性白细胞分布在S-C散点图的MO-BA区域。进一步展开到MO-BA分类用散点图时，则单核细胞分布在MO区域，嗜碱性白细胞分布在BA区域。嗜中性白细胞及嗜酸性白细胞分布在S-C散点图的NE-EO区域，进一步展开到NE-EO分类用散点图时，嗜中性白细胞分布在NE区域，而嗜酸性白细胞分布在EO区域。 通俗的说法是，这个分类原理只有三个角度，国内的介绍材料上说是4角度，这纯属误导，是把激光直射也算上了，在mek的官方材料上根本没有这个说法。在主散射图上就是淋巴lym，单核和嗜碱通道mo+ba, 中性和嗜酸通道 ne+eo,就是说在小角度光散射确定了体积的情况下结合大角度光散射能够测出的分群只有三个，其中淋巴是确定的。在mo+ba散射图上，清楚的分出了单核和嗜碱，就是说在小角度光散射确定了细胞体积的基础上，结合垂直角度光散射能够区分出两个分群，单核和嗜碱都是确定的，还有一个附属分类就是lic,即巨大不成熟细胞或者被称作为淋巴影子细胞，在这个仪器上并不单独出示lic数据。在ne+eo散射图上，清楚的分出了中性和嗜酸，就是说在小角度光散射确定了细胞体积的基础上，结合垂直角度光散射能够区分出两个分群，中性和嗜酸都是确定的。但是要说明是，我个人认为这五项分类当中有一项是计算出来的，而且，这个仪器在激光部分失灵或者五分类无法工作的情况下，应该可以充当三分类使用，因为wbc有着单独的计数通道，而且也出现wbc直方图，因此，有了直方图通过软件就可以进行分类的，但是官方没有具体的说法。 ABX PENTRA 计数分类测定方法及原理： 1、RBC/PLT: 电阻法 WBC/BAS计数：电阻法，由于采用差别溶解技术，WBC和BAS被一同计数出来，利用界标线进行判别，提供BAS直方图和WBC,BAS # %数值。 上图就是差别溶解之后取得的直方图，WBC总数就是图中WBC和BAS部分的总和，在BAS区域中由于数值很少 ，因此经常是空白，这时由于针式打印机无法细腻的打印出来的结果，如下图： 4、双鞘流（DHSS）分类计数，整个过程如下，血液标本进入LMNE混合池试剂混合形成混合溶液，孵育时间为12秒，这时RBC/PLT/BAS细胞已经被试剂破坏掉，在鞘流泵作用下进鞘流池进行双鞘流计数，首先经过红宝石孔进行电阻法计数，判断细胞体积，然后在200ms之内通过鞘流直径为42um的鞘流通道进行光吸收测定判断细胞内容物，整个计数时间为12秒。这样形成分类散射图，并提供lym,gra,mon,eo,lic,aly的绝对值和百分比。 双鞘流计数是abx的专利技术，详细原理如下： 根据上图可以看到，在进行双鞘流计数的时候，首先进行的是鞘流电阻计数，对细胞进行体积测定，然后再进行光吸收比率测定，对细胞内容物进行测定，最终将这个细胞在散射涂上标注出来，在双鞘流的上下两端分别加上恒流电源，以保证电阻法测量，孵育后的溶液在右侧鞘流泵的作用下经过6号口进入鞘流池从1号口流出，为了保证这些检