硼替佐米耐药骨髓瘤细胞株的建立和其差异表达蛋白的飞行时间质谱分析.pdf

第38卷 第5期 浙 江 大 学 学 报 (医 学 版 ) Vol38 No5 20O9正 JOuRNALOFZHEJIANGUNIVERSITY (MEDICALSCIENCES) 2009 http：∥WWW．journals．zju．edu．cn／med DOI：10．3785／]．issn．1008—9292．2009．05．003 硼替佐米耐药骨髓瘤细胞株的建立及其 差异表达蛋白的飞行时问质谱分析 朱 蓉 ，奚 昊 ，李勇华 ，姜 华 ，邹剑锋 ，侯 健 (1．第二军医大学长征医院血液内科，上海 200003；2．广州军区总医院血液科，广东 广州 510010) [摘 要] 目的：建立硼替佐米耐药的骨髓瘤细胞株，探讨硼替佐米敏感和耐药多发性骨髓瘤细胞 株在蛋白质组水平上的差异。方法：采用硼替佐米浓度递增法诱导NCI—H929细胞株产生耐药株。 采用流式细胞术 比较亲本NCI—H929和NCI—H929B的细胞周期 ，双 向电泳 (2-DE)及基质辅助激光 解吸电离飞行时间质谱 (MALDI—TOF—MS)技术分析两者 间的差异蛋 白表达情况。采用Western blot方法对部分鉴定结果进行验证 。结果：采用浓度递增法 自骨髓瘤细胞系NCI—H929建立 了硼替 佐米耐药株NCI—H929B。MTT法检测硼替佐米对亲本NCI—H929和NCI—H929B24h的IC。，其分 别为2O．7nmol／L和487．4nmol／L，耐药倍数为23．5。生长 曲线及流式细胞术分析显示NCI—H929 亲本和NCI—H929B的生长曲线和细胞周期分布无显著性差异。与亲本NCI—H929细胞 的2一DE相 比，NCI—H929B细胞 中有 11个蛋 白点表达 明显上调 ，6个明显下调 。对这 17个蛋 白质点进行 MALDI—TOF—MS分析，共获得 了17个肽质量指纹图谱 (PMF)。将PMF质量数据通过Aldente软 件查询 SWISS—PROT数据库 ，根据 匹配片段及氨基酸序列覆盖率等，初步鉴定 出 14种蛋 白质。 Westernblot验证其中一种蛋 白质 (蛋 白DJ一1)，结果与双 向电泳鉴定结果基本一致 。结论 ：通过浓 度递增法可建立硼替佐米耐药的骨髓瘤细胞株 。双向电泳结果提示这些差异表达的蛋 白质可能与 多发性骨髓瘤对硼替佐米耐药的机制有关。 [关键词] 多发性骨髓瘤 ／药物疗法；抗药性，肿瘤；硼酸化物／治疗应用 ；吡嗪类 ／治疗应用； 蛋 白质类 ／分析 ；电泳，凝胶 ，双 向 [中图分类号] R733．3 [文献标志码] A [文章编号] 1008—9292(2009)05—0445—08 Establishment of a bortezom ib-resistant m yeloma cell line and differentialproteinsanalysisbyM ALDI-OF-M S ZHU Rong，XIHao，LIYong—hua，JIANG Hua，ZOU Jian—feng，HOU Jian (Departm~entof Hematology，Changzheng H ospital，TheSecond M ilitary MedicalUniversity，Shanghai200003， China) [Abstract] Objective：Toestablishabortezomib—resistantmyelomacelllineandtoinvestigate itsmechanism．M ethods：Bortezomib—resistantNCI—H929cellline(NCI—H929B)wasobtainedby stepwiseincreasing extracellularconcentrationsofbortezomib overaperiodof8months．The biologicalcharacteristicsofNCI—H929andNCI—H929Bwereobserved．Proteinsfrom NCI—H929B 收稿 日期 ：2009—05—22 修 回 日期 ：2009—08—17 作者简介 ：朱 蓉 (198O一)，女，博士研究生 ，主要从事浆细胞疾病 的研究