C3-2 基因工程载体.pdf

3.1 质粒载体 3.1.1 质粒的基本特性 3.1.2 标记基因 3.1.3 质粒载体的种类 3.1.2 标记基因 3.1.2 标记基因 • 选择标记基因：鉴别载体的存在，筛选成功 • 选择标记基因：鉴别载体的存在，筛选成功 转化了载体的宿主菌（转化子）。 转化了载体的宿主菌（转化子）。 • 筛选标记基因：区别重组质粒与非重组质 • 筛选标记基因：区别重组质粒与非重组质 粒，筛选成功转化了携带有外源DNA片段的 粒，筛选成功转化了携带有外源DNA片段的 重组质粒的宿主菌（重组子）。 重组质粒的宿主菌（重组子）。 标记基因 标记基因 选择标记基因 选择标记基因 筛选标记基因 筛选标记基因 • 氨苄青霉素抗性基因 • 氨苄青霉素抗性基因 • 插入失活 • 插入失活 r r ampr r amp /Ap /Ap r 负向选择 如Tetr等 负向选择 如Tet 等 r r 正向选择 如SacB等 • 四环素抗性基因tet 正向选择 如SacB等 • 四环素抗性基因tet • α-互补 来自淀粉水解芽胞 r • α-互补 r 杆菌（Bacillus • 氯霉素抗性基因Cm /cat • 氯霉素抗性基因Cm /cat amyloliquefaciens ） ，编码果聚糖蔗糖 r • 卡那霉素抗性基因kanr • 卡那霉素抗性基因kan 酶。在含蔗糖的培 养基上sacB 基因的 表达对大肠杆菌来 负向选择：非重组子 正向选择：重组子 说是致死的 在培养基上生长，而 在培养基上能生 重组子不能生长。 长，而非重组子不 能生长。 选择标记 负向选择 负向选择 负向选择 负向选择 α-互补（α-complementation） ♦是指β-半乳糖苷酶基因(lacZ)上缺失近操纵基因区段的突变体