第08课：研究生课 生理学实验技术201009.ppt

专题I：溶液的配制 2010年9月 1、实验台准备 2、器皿的准备 3、药品的准备 4、浓度的确定及计算 （1）摩尔浓度 1L溶液里含有多少摩尔溶质表示的溶液浓度称为摩尔浓度，M，计算公式： 含结晶水的盐溶液摩尔浓度的配制 需配制0.1M的Na2CO3溶液1mL，现有药品为Na2CO3?10H2O，如何配制？需称多少克？ （2）当量浓度 当量浓度(N， normality) ：1升溶液所含溶质的克当量数。过去常用，现只用于部分酸溶液。 当量浓度与摩尔浓度的换算：与化合价有关，一当量即得失一个电子 盐酸放出一个H+，化合价为1，1N HCl=1M HCl 硫酸化合价2, 放2质子，1M H2SO4 =2N H2SO4 （3）百分比浓度 1% NaCl：1g，100mL 75% 乙醇，V/V 要配250mL 1M的硫酸溶液，市售的浓硫酸为密度1.836 g/cm3、浓度98%，问取多少mL这样的浓硫酸? 5、称量 配制标准溶液 配制步骤： 例：配制1升0.01mol/L的KMnO4溶液配制标准溶液的步骤： 1． 计算所需溶质KMnO4的质量：n=0.01×1=0.01mol 质量m=0.01mol×158=1.58克 2． 称量：称取1.58g固体KMnO4 3． 溶解：在烧杯中用50ml左右的蒸馏水溶解KMnO4 4． 移液：溶液必须冷却后才能转移到容量瓶中。 5． 洗涤烧杯3次，一并移入容量瓶 6． 定容 7． 振荡摇匀，装入试剂瓶，贴上写好的标签（浓度、时间、人） 干粉倾倒入三角瓶时的注意事项 普通溶液的配制： 量筒：多数生化试剂 量杯：生理盐溶液 带刻度的烧杯试管：浓度要求不高的洗涤溶液，浸泡载波片的2%盐酸，洗液 带刻度的离心管 水的选择 蒸馏水：一蒸，二蒸，三蒸 开水： 自来水： 去离子水： PH的调节 精密pH试纸：室温，自然光照 pH计，用标准溶液定期标定校准 贮备溶液及其稀释 室温 4℃ NaN3, 柳硫汞 1/1000 -20 ℃ 50% 甘油， 5% 特殊溶液的配制及其注意事项 1、EDTANa2，只能溶解于pH8.0的水中 2、DNA样品：浓溶液形式溶解于pH8.0以上的碱性水溶液中 3、RNA样品：浓溶液形式溶解于pH5.2以下的酸性水溶液中 4、蛋白溶液：浓溶液溶于中性缓冲液PBS中 5、抗菌问题： 0.05-0.1%叠氮钠，0.01%柳硫汞 1、苏木精 苏木精是从南美的苏木（热带豆科植物）干枝中用乙醚浸制出来的一种色素，是最常用的染料之一。苏木精不能直接染色，必须暴露在通气的地方，使他变成氧化苏木精（又叫苏木素）后才能使用，这叫做“成熟”。苏木精的“成熟”过程需时较长，配置后时间愈久，染色力愈强。被染材料必须经金属盐作媒剂作用后才有着色力。所以在配制苏木精染剂时都要用媒染剂。常用的媒染剂有硫酸铝按、钾明矾和铁明矾等。 苏木精是淡黄色到锈紫色的结晶体，易溶于酒精，微溶于水和甘油，是染细胞核的优良材料，他能把细胞中不同的结构分化出各种不同的颜色。分化时组织所染的颜色因处理的情况而异，用酸性溶液（如盐酸—酒精）分化后呈红色，水洗后仍恢复青蓝色，用碱性溶液（如氨水）分化后呈蓝色，水洗后呈蓝黑色。 2、洋红 洋红又叫胭脂红或卡红。一种热带产的雌性胭脂虫干燥后，磨成粉末，提取出虫红，再用明矾处理，除去其中杂质，就制成洋红。单纯的洋红不能染色，要经酸性或碱性溶液溶解后才能染色。常用的酸性溶液有冰醋酸或苦味酸，碱性溶液有氨水、硼砂等。 洋红使细胞核的优良染料，染色的标本不易褪色。用作切片或组织块染都适宜，尤其适宜于小型材料的整体染色。用洋红配成的溶液染色后能保持几年。洋红溶液出现浑浊时要过滤后再用。 人工染料 种类很多，应用极广。缺点是经日照易褪色，苯胺蓝、亮绿、甲基绿等更易褪色。在制片中注意掌握酸碱度，并避免日光直射，也能经几年不褪色。 1、伊红：有很多种。常用的伊红Y，酸性染料，呈红色带蓝的小结晶或棕色粉末状，溶于水（15摄氏度时溶解44%）和酒精（无水酒精中溶解2%）。动物制片常用，是很好的细胞质染料 2、固绿：酸性染料，能溶于水（溶解度为4%）和酒精（溶解度为9%）。应用极广，与苏木精、番红并列为植物组织学最常用的染料。 3、苏丹Ⅲ，脂肪染色剂。弱酸性染料，红色粉末状，易溶于脂肪和酒精（溶解度为0.15%） 4、酸性品红：酸性染料，红色粉末，能溶于水，略溶于酒精（0.3%）。良好的细胞质染色剂，用于动物和植物切片。与甲基绿同染，能显示线粒体。组织切片在染色前先浸酸性水中，可增强它的染色力。酸性品红容易跟碱起作用，所以染色过度，易在自来水中褪色。 5、刚果红：酸性染料，呈枣红色粉末状，能溶于水和酒精，遇