重组葡萄糖脱氢酶的表达及辅酶再生应用研究-武汉科技大学学报.pdfVIP

第 卷第 期 武 汉 科 技 大 学 学 报 , 40 2 Vol.40No.2 年 月 2017 4 JournalofWuhanUniversitofScienceandTechnolo Ar.2017 y gy p 췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍 : / DOI10.3969 .issn.1674-3644.2017.02.014 j 重组葡萄糖脱氢酶的表达及辅酶再生应用研究 , , , , , 李凌凌 刘曜宁 吕早生 杨忠华 左振宇 宋采薇 ( , , ) 武汉科技大学化学与化工学院 湖北 武汉 430081 : ( ) 摘要 为解决异源表达酮还原酶域 ErKR1的重组大肠杆菌EscherichiacoliBL21 ET28aerKR1催化环 y p -y , 己酮还原时消耗的氢供体 NADPH再生的问题 构建了克隆枯草芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶基因gdh的重组菌 ( ), E.coliBL21 ET28a dh 其中的 dh基因经 NucleotideBLAST功能分析显示与枯草芽孢杆菌 9902的 p g g - ( ) 。 gdh基因序列 登录号为EF626962.1的一致性达到 100% SDS检测显示该重组菌经 IPTG诱导后 可以高效表达出葡萄糖脱氢酶( ),其表达量占全菌可溶性蛋白质的 。 粗酶液的比酶活为 GDH 64% GDH / 。通过气相色谱检测添加了 ( )的 ( )环己 137.90U m E.coliBL21 ET28a dh E.coliBL21 ET28aerKR1 g p g p y - - , 酮还原反应体 系中的环己醇含量 结果显示加入重组 GDH的双重组菌耦合反应体系中环己醇的产率为 , , 82.21% 是未添加 GDH的反应体系对应值的3.23倍 表明重组 GDH可以为ErKR1还原环己酮系统解决 y 辅酶再生问题。 : ; ; ; ; ; ; 关键词 葡萄糖脱氢酶 重组菌 异源表达 辅酶再生 生物催化 环己酮 枯草芽孢杆菌 中图分类号: ;