黑曲霉孢子悬液贮存期的验证-中国药品标准.docVIP

黑曲霉孢子悬液贮存期验证 林吉恒1肖璜2 马仕洪2 胡昌勤((1. 舟山市食品药品检验所，舟山316021；2.中国食品药品检定研究院，北京100050） 摘要对贮存期的黑曲霉孢子悬液低温（4℃）保存6个月内黑曲霉孢子悬液菌落计数结果药物敏感性未出现变化可直接稀释使用关键词黑曲霉孢子悬液贮存期验证 中图分类号：R921.2 文献标识码：A The Verification of Aspergillus niger Spore Suspension’s Storage Period Lin Jiheng1，X Huang2，M Shihong2 , Hu Changqin2*（1. Zhoushan Institute for Food and Drug Control, Zhoushan 316021; 2.National Institutes for Food and Drug Control, Beijing 10050） Abstract Objective：To investigate and study the quality of Aspergillus niger spore suspension . Method：By counting and susceptibility test to conduct the experiments. Result： The cryopreservation (4°C) of Aspergillus niger spore suspension within 6 months showed no significant changes in drug sensitivity and counting results of colonies were stable , conformed to the standard of Chinese Pharmacopeia. Conclusion：Aspergillus niger spore suspension can be diluted directly in the specific experiment during the the storage that was verified. Keywords：Aspergillus niger； spore suspension；verification of the storage period,； verified method 药品微生物检验是评价药品质量、保证人民用药安全的重要手段之一。实验菌种保藏是保证研究、检验、交换和使用等的重要的基础工作及关键技术[1]。5代。 黑曲霉是《中国药典》2010年版及美国药典36版两国药典中均明确稳定的孢子悬液在验证过的期内直接稀释使用但对贮存期未做过多描述。通过计数实验药敏实验对黑曲霉孢子悬液贮存期进行验证黑曲霉孢子悬液验证 1仪器与材料1.1仪器生物安全柜恒温培养箱电子天平灭菌器 1.2培养基玫瑰红钠琼脂培养基蛋白胨大豆肉汤（TSB）北京三药 1.3试药氟康唑注射液生产企业提供，规格5ml 0.2g)。 1.4菌种黑曲霉（Aspergillus） CMCC(F) 98 003〕来源于中国食品药品检定研究院中国医学微生物菌种保藏管理中心，工作菌株为第3代。 2实验方法 .1菌液制备23~28℃培养5~7d，用含0.05%聚山梨酯80的灭菌蒸馏水琼脂斜面黑曲霉孢子悬液用含0.05%80的灭菌蒸馏水稀释后分装于灭菌的菌种冻存管（1ml/管）中。菌种冻存管分成两组一组放置在室温（25℃）贮存，另一组放置在冰箱（4℃）贮存。 .2计数1个月取不同贮存条件5管菌进行梯度稀释，以玫瑰红钠琼脂培养基浇碟3次，于25℃培养3后进行计数。 .3药敏试验参考NCCLS微量稀释法[]，1个月取冰箱中贮存的菌悬液，考察其氟康唑状况。取96孔微量反应板，每孔分别加入180μl胰蛋白胨大豆肉汤，首样品组加入氟康唑注射液20μl混匀，随后样品组取前一样品组中20μl混合液混匀，共设10个样品组。最后每孔加孢子悬液20μl。设不加试药的对照组和无的空白对照组，25℃培养3后观察其浓度MIC)。每个保存条件试验重复4 3实验结果 .1计数 图1 不同温度条件下菌液计数结果 黑曲霉孢子悬液，3个月的菌数见1。25℃（室温保存菌数出现情况，4℃（低温）保存菌数相对稳定。孢子悬液中美两国药典中建议孢子悬液2～8℃条件贮存。 ℃条件下黑曲霉孢子悬液4℃保存孢子悬液结果方差分析表孢子悬液第0个月与第1个月没有显著性差异P=0.772），显著高于第2（P﹤0.0）第个月的第3个月的结果（P﹤0.0）第个月结果无显著性差异（P0.05）。 表1 4℃条件下菌数的统计