01-培养基的制备及高压灭菌.ppt

微生物基础实验项目 1、培养基制备与灭菌； 2、微生物的分离培养与菌落观察； 3、水的细菌学检验； 4、细菌的染色检验：简单染色、革兰氏染色、芽孢与荚膜染色； 5、放线菌、霉菌的形态观察； 6、微生物生理、生化反应； 7、微生物直接计数与大小测定； 8、环境因素对微生物的影响。 微生物基础实验注意事项 1、提高安全意识，正确操作仪器； 2、培养无菌操作的观念； 3、自觉清洗器皿； 4、注重保持环境卫生和实验室秩序； 培养基的制备与灭菌 一、目的： 1、学习一般培养基的制备方法； 2、掌握高压蒸汽灭菌技术，了解几种常用的灭菌方法。 二、原理 1、培养基(culture medium)：培养基是按照微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工的方法配制而成的一种基质。 培养基的种类：根据培养基的成分可分为天然培养基、合成培养基、半合成培养基；按物理性状不同，可分为固体培养基、半固体培养基和液体培养基；根据培养基的特殊用途可分为基础培养基、加富培养基、选择培养基和鉴别培养基。 ⑴天然培养基：主要成分是天然有机物质，如马铃薯、玉米粉、豆饼粉、豆芽汁、牛肉膏、蛋白胨、血清等，其成分未完全了解，且各批次不均一。适用于生产上大规模培养微生物。 ⑵合成培养基：成分明确的化学药品配制而成的培养基。如：高氏一号培养基、查氏培养基等。一般适用于在实验室范围内研究微生物的形态、营养代谢、分类鉴定、生物测定、菌种选育和遗传分析等工作。 ⑶半合成培养基：在天然有机物的基础上，适当补充一些成分已知的化学药品所配制的培养基。具有广泛的应用，如马铃薯葡萄糖培养基，适合很多霉菌的生长。 ⑴液体培养基：配好后成为液体状态的培养基。如糖发酵液体培养基、蛋白胨水培养基等。广泛用于理论研究和大规模的工业发酵。 ⑵固体培养基：在液体培养基中加入凝固剂形成的固态培养基。常用凝固剂有琼脂、明胶、硅胶。硅胶用于配制自养微生物的固体培养基；对于其他多数微生物来讲，琼脂最为合适，一般加入1.5-2.5%，如牛肉膏蛋白胨培养基等。此培养基可供微生物的分离、鉴定、菌种保藏等。 ⑶半固体培养基：在液体培养基中加入少量凝固剂即配成为半固体培养基，如，加入0.2-0.7%琼脂作为凝固剂。用来观察细菌运动特征、鉴定菌种、菌种保藏和噬菌体的效价滴定等。 根据培养基的特殊用途分类： ⑴基础培养基：含有一般细菌生长繁殖所需的基本营养物质，常用的基础培养基是牛肉膏蛋白胨培养基，也是作为某些特殊培养基的基础成分。 ⑵加富培养基：是在基础培养基中加入血、血清、动物组织提取液或植物组织提取液，主要用于培养某些对营养要求较为苛刻的微生物。 ⑶选择培养基：根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学条件的抗性而设计的培养基。 ①根据某些微生物对碳、氮源的特殊要求来设计选择性培养基，可以分离到能分解某些物质的微生物。 ②在培养基中加入某些化学物质，以抑制不需要的微生物的生长繁殖。如在分离放线菌时，在培养基中添加10%的酚数滴可抑制细菌和霉菌的生长。 ⑷鉴别培养基：在基础培养基中加入某种化合物或化学试剂，使培养的微生物产生某种代谢产物与该化合物或化学试剂发生明显的特征性反应，根据这一特征性反应可以将此种微生物与其他种微生物区别开来，如伊红美蓝培养基 。 2、灭菌： 消毒与灭菌是两个不同的概念。 消毒：一般是指消灭病原菌和有害微生物的营养体而言，而不能杀死全部芽孢，因此，消毒对微生物的杀灭是不彻底的，而且往往只能作用到物体表面，只能作为一般的卫生措施。如使用酒精、84消毒液浸泡或煮沸法对器械的表面消毒处理，用紫外灯对房间进行照射等。 灭菌：杀灭一切微生物的营养体、芽孢和孢子，因此，灭菌后的物品不再带有活体微生物。灭菌的方法很多，如加热(干热或湿热)、过滤等。 ⑴ 干热法灭菌： a) 火焰烧灼：适用于接种环、接种针、镊子等金属用具，无菌操作时的试管口和瓶口也在火焰上短暂烧灼灭菌。 b) 热空气灭菌：使用电热干燥箱，借助热空气在160-1700C下保温2小时进行灭菌，此法适用于玻璃器皿（如吸管和培养皿）等的灭菌，对带胶皮的器物或培养基不适用。 ⑵ 湿热灭菌： a) 高压蒸汽灭菌 高压蒸汽灭菌锅内1.05kg/cm2（15磅/英寸2），121.30C保持15—30分钟进行灭菌。这种灭菌适用于培养基等的灭菌。 b) 间歇灭菌法 少数培养基，例如明胶培养基、牛乳培养基、含糖培养基等，高温高压灭菌易被破坏，适用间歇灭