流式细胞分析的原理和应用2014.pdf

流式细胞仪分析技术及应用 黄赞 第⼀节概述 ⼀、工作原理 二、散射光的测定 三、荧光测量 四、细胞分选原理 第二节数据的显示与分析 ⼀、参数 二、数据显示方式 三、设门分析技术 第三节流式细胞仪免疫分析的技术要求 ⼀、免疫检测样品制备 二、免疫分析中常用的荧光染料与标记染色 三、流式细胞免疫学技术的质量控制 四、应用 流式细胞术(flow cytometry, FCM)是以流式细 胞仪为检测手段的⼀项能快速、精确的对单个 细胞理化特性进行多参数定量分析和分选的新 技术。 参考书： 流式细胞术，陈朱波，曹雪涛，科学出版社 2010年 流式细胞术的特点 流式细胞术最大的特点是能在保持细胞及细胞 器或微粒的结构及功能不被破坏的状态下，通过 荧光探针的协助，从分子水平上获取多种信号对 细胞进行定量分析或纯化分选。 细胞不被破坏，测量快速、大量、准确、灵敏、定量、多参数、 高纯度分选 流式细胞仪与显微镜的区别 区别 流式细胞仪 显微镜 光源 激光 自然光、灯光、激光 对象 细胞、生物粒子 细胞、组织等 承载工具 鞘液及流动室 载玻片 检测信号 光学信号 形态及染色 放大方式 PMT、放大电路 目镜×物镜、光学放大 统计 计算机，5000 人工，200 结果 多参数，综合分析 简单，少数参数 第⼀节概述 流式细胞仪是测量染色细胞标记物荧光强 度的细胞分析仪，是在单个细胞分析和分 选基础上发展起来的对细胞的物理或化学 性质（如大小、内部结构、DNA、RNA、 蛋白质、抗原等）进行快速测量并可分类 收集的高技术。 流式细胞术发展史 •  1930 年，Caspersson 和Thorell 开始致力于细胞的 计数。 •  1934 年，Moldaven 是世界上最早设想使细胞检测自 动化的人，他试图用光电仪记录流过一根毛细管的 细胞。 •  1936 年，Caspersson 等引入显微光度术。 •  1940 年，Coons 出用结合了荧光素的抗体去标记 细胞内的特定蛋白。 •  1947 年，Guclcer 运用层流和湍流原理研制烟雾微粒 计数器。 发展史 •  1949 年，Wallace Coulter 出在悬液中计数粒子的方 法的专利。 •  1950 年，Caspersson 用显微分光光度计的方法在UV 和可见光光谱区检测细胞。 •  1953 年，Croslannd-Taylor 应用分层鞘流原理，成功 的设计红细胞光学自动计数器。同年，Parker 和Horst 述一种全血细胞计数器装置，成为流式细胞仪的 雏形。 发展史 •  1954 年，Beirne 和Hutcheon 发明光电粒子计数器 •  1959 年，B 型Coulter 计数器 •  1965 年，Kamemtsky 等出两个设想，一是用分光 光度计定量细胞成分；二是结合测量值对细胞分类。 •  1967 年，Kamentsky 和Melamed 在Moldaven 的方法 的基础上出细胞分选的方法。 发展史 •  1969 年，Van Di