第十二章抗生素测定.ppt

第十二章抗生素效价微生物检定法 学习目标 掌握抗生素微生物检定法的基本原理； 掌握管碟法二剂量法的具体操作步骤及相关注意事项 能使用管碟法对药物进行效价测定 第一节 概述 一、抗生素的概念及抗生素的生物检定 抗生素是由微生物所产生的极微量便具有选择性地杀死或抑制其他病原微生物生长的一类天然有机化合物。 抗生素的生物检定是以抗生素对微生物的抗菌效力作为效价的衡量标准。 第一节 抗生素的效价和单位 一、抗生素的效价和单位 抗生素的含量用效价和单位表示。该词有时不加区别统称为效价单位。 效价（ｐotency），指检品的实际单位数与其标示量的比值。常表示为效价的百分数。 单位（unit,u）单位是衡量抗生素有效成分的具体尺度。 标准品与国际单位(international unit,iu) 抗生素微生物测定用的标准品，除国内的新品种外，凡已制备国际标准品的品种，在制备国家标准品时，均与国际标准品比较而定出效价。 二、抗生素标准品含量的表示方法 三、抗生素效价微生物测定技术 （一）概述 　2、浊度法系利用抗生素在液体培养基中对试验菌生长的抑制作用，通过测定培养后细菌浊度值的大小，比较标准品与供试品对试验菌生长抑制的程度，以测定供试品效价的种方法。 第二节 管碟法测定抗生素效价原理和方法 一 原理 在一定的抗生素浓度范围内，对数剂量(浓度)与抑菌圈的表面积或直径成正比，可以得出一条曲线。 抗生素浓度换算成对数，则抑菌圈直径与抗生素对数成直线关系 （一）管碟法测定原理 3、管碟法：是利用抗生素在含敏感试验菌的琼脂培养基中的球面扩散渗透作用，从而形成一定的抑菌圈。 通过琼脂培养基，可观察并测量出抑菌圈的大小。 （二）管碟法的材料 （二）管碟法的材料 （二）管碟法的材料 （二）管碟法的材料 （二）管碟法的材料 第三节 管碟法测定操作 1. 试验用菌液、缓冲液、培养基的制备 按兽药典规定进行制备。 抗生素效价检定管碟法操作流程 1. 试验用菌液 金黄色葡萄球菌悬液：取金黄色葡萄球菌的营养斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，在35~37℃培养20h到22h，；临用前用水或者灭菌生理盐水溶液将菌苔洗下，备用。 大肠杆菌悬液：取大肠杆菌的营养斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，在35~37 ℃培养20h到22h；临用前用水或者灭菌生理盐水溶液将菌苔洗下，备用。 细菌浓度：在试验之前，可以先做一个关于用不同浓度菌液配制的琼脂培养基菌层预试验，选择抑菌圈直径在18～22mm的菌液浓度为试验用浓度 （菌液浓度约为10 个/mL）。 2 供试品及标准品的配制 在称量抗生素样品过程中，操作者的工作服上有可能会沾染抗生素粉末，在配培养基、加底层培养基、加菌层培养基或滴加抗生素溶液时，会随衣袖的抖动落入培养基，造成破圈或者无抑菌圈。 所以配制抗生素溶液应单独使用一套工作服。 放置小钢管时，注意管与管之间不能太靠近，否则会引起相邻的两个抑菌圈之间的抗生素扩散区中的浓度增大，相互影响形成卵圆形或椭圆形抑菌圈。 管与双碟边缘同样也不能太靠近，因为液面浸润作用，边缘的琼脂培养基菌层为非平面，会影响抑菌圈的形状。 可在试验前在双碟的底上用尺测量，作好标记。 滴加了抗生素溶液后的双碟忌震动，要轻拿轻放。在搬运到培养箱的过程中，可以预先在培养箱中垫上报纸铺平，再把双碟连同垫于桌上的玻璃板小心运至培养箱，缓慢推入箱内。 双碟在37℃下培养约16~18h。时间太短会造成抑菌圈模糊，太长则会使菌株对抗生素的敏感性下降，在抑菌圈边缘的菌继续生长，使得抑菌圈变小。 （二）抑菌圈的形成 在平板底部四边，分别对角注明“SH”、“SL” 和“TH”、“TL”标记 将不锈钢小管(俗称为牛津杯)放置在含敏感试验菌的琼脂培养基上。 以无菌滴管分别在每个牛津杯内加入相应的抗生素溶液至满但不溢出管外 且四杯内液面高度相同，盖上平皿盖，静置30分钟。 （二）抑菌圈的形成 将培养基置入适宜试验菌生长的培养箱中，琼脂培养基中的试验菌开始生长。 （二）抑菌圈的形成 抗生素分子随溶剂向培养基内呈球面状放射状扩散。 （二）抑菌圈的形成 　　 抗生素分子在琼脂培养基中的浓度，随离开小钢管的距离增大而降低。 离小钢管愈远，琼脂培养基中抗生素分子愈少，相应的抗生素浓度愈低。 （二）抑菌圈的形成 当抗生素分子扩散到一定时间，在小钢管周围形成一个能有效的抑制试验菌生长