细胞破碎与固液分离技术.ppt

第一章 细胞破碎与固液分离技术 第一章 细胞破碎与固液分离技术 第一节 发酵液的预处理技术 第一节 发酵液的预处理技术 第一节 发酵液的预处理技术 第一节 发酵液的预处理技术 第一节 发酵液的预处理技术 第一节 发酵液的预处理技术 第一节 发酵液的预处理技术 第一节 发酵液的预处理技术 第一节 发酵液的预处理技术 第一节 发酵液的预处理技术 第一节 发酵液的预处理技术 第一节 发酵液的预处理技术 第一节 发酵液的预处理技术 第一节 发酵液的预处理技术 第一节 发酵液的预处理技术 第一节 发酵液的预处理技术 第一节 发酵液的预处理技术 第一节 发酵液的预处理技术 第一节 发酵液的预处理技术 第一节 发酵液的预处理技术 第一节 发酵液的预处理技术 第二节 固液分离 第二节 固液分离 第二节 固液分离 第二节 固液分离 第二节 固液分离 第二节 固液分离 第二节 固液分离 第二节 固液分离 第二节 固液分离 第二节 固液分离 第二节 固液分离 第二节 固液分离 第二节 固液分离 真空转鼓过滤机特别适合于固体含量较大（10%）的悬浮液的分离，由于受推动力(真空度)的限制，真空转鼓过滤机一般不适合于菌体较小和粘度较大的细菌发酵液的过滤，而且采用真空转鼓过滤机过滤所得固相的干度不如加压过滤。目前，在标准型转鼓真空过滤机的基础上，又开发出一些新设备，如无格式转鼓真空过滤机、滤布循环行进式（RCF）转鼓真空过滤机等。新机型的特点是结构简单、单位面积过滤能力大、洗涤能力强、效率高。 第二节 固液分离 第二节 固液分离 管式离心机 碟片式离心机的分离因数为1000～20000，适应于含细菌、酵母菌、放线菌等多种微生物细胞的悬浮液及细胞碎片悬浮液的分离。它的生产能力较大，最大允许处理量达300m3/h，一般用于大规模的分离过程。 第二节 固液分离 第二节 固液分离 第二节 固液分离 第二节 固液分离 第二节 固液分离 第二节 固液分离 第二节 固液分离 第二节 固液分离 第三节 细胞壁的破碎 第三节 细胞壁的破碎 第三节 细胞壁的破碎 第三节 细胞壁的破碎 第三节 细胞壁的破碎 第三节 细胞壁的破碎 第三节 细胞壁的破碎 第三节 细胞壁的破碎 一般用破碎率Y表示破碎程度。破碎率定义为被破碎细胞的数量占原始细胞的百分数。 第三节 细胞壁的破碎 第三节 细胞壁的破碎 第三节 细胞壁的破碎 第三节 细胞壁的破碎 第三节 细胞壁的破碎 第三节 细胞壁的破碎 第三节 细胞壁的破碎 第三节 细胞壁的破碎 第三节 细胞壁的破碎 第三节 细胞壁的破碎 第三节 细胞壁的破碎 第三节 细胞壁的破碎 第三节 细胞壁的破碎 （2）干燥法 将待破碎细胞用不同方法进行干燥，菌体细胞失水，细胞内盐分浓度增大，细胞渗透性发生变化，然后用丙酮，乙醇或缓冲溶液等溶剂抽提胞内物质。干燥的方法有空气干燥、真空干燥、冷冻干燥等。对不稳定生化物质进行干燥时，常加入半胱氨酸，巯基乙醇和亚硫酸钠等还原剂进行保护。 空气干燥（气流干燥）主要适用于酵母菌，真空干燥多用于细菌，冷冻干燥多用于较不稳定的生化物质。 第三节 细胞壁的破碎 第三节 细胞壁的破碎 ①提取的产物在细胞质内，选用机械破碎法； 　②在细胞膜附近则可用温和的非机械法； 　③提取的产物与细胞壁或膜相结合时，可采用机械法和化学法相结合的方法，以促进产物溶解度的提高或缓和操作条件； 　④为提高破碎率，可采用机械法和非机械法相结合的方法。如面包酵母的破碎，可先用细胞壁溶解酶予处理，然后用高压匀浆机在95Mpa压力下匀浆四次，总破碎率可接近100%，而单独用高压匀浆机破碎率只有32%。 第四节 包涵体 第四节 包涵体 ④重组蛋白是宿主菌的异源蛋白，大量生成后，缺乏后修饰所需酶类和辅助因子，如折叠酶及分子伴侣等，导致中间体大量积累导致沉淀； ⑤与重组蛋白本身的溶解性有关，有的表达产率很高，如Aspartase和Cyanase,表达产率达菌体蛋白的30%,也不形成包涵体，而以可溶形式出现； ⑥在细菌分泌的某个阶段，蛋白质间的离子键、疏水键或共价键等化学作用导致了包涵体形成； ⑦发酵温度高或胞内pH接近蛋白的等电点时容易形成包涵体。 第四节 包涵体 细胞破碎后离心分离的包涵体沉淀物中，除目标蛋白质外，还有其他蛋白质、核酸等的存在，经过洗涤，可以除去吸附