蛋白质分离纯化检测分析技术及其应用.ppt

【范文泽】制作;;;沉淀 盐析 丙酮沉淀 免疫沉淀;盐析; 丙酮、甲醇、乙醇等沉淀: 此类有机溶剂能使蛋白质在水溶液中的溶解度降低。低温（零下40-60度）进行，丙酮用量一般10倍于蛋白质溶液体积。蛋白质被丙酮沉淀后，应立即分离。 免疫沉淀：由于蛋白质具有抗原性，利用特异性的抗体识别相应的抗原蛋白，并形成抗原抗体复合物的性质，从蛋白质混合溶液中获得相应的抗原蛋白。;透析;;电泳;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳原理;层析;凝胶层析 离子交换层析 凝胶层析亦称凝胶过滤、排阻色谱或分子筛层析等。其机理是分子筛效应，主要根据蛋白质分子的大小进行分离和纯化。层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质，多是交联的聚糖(如葡聚糖或琼脂糖)类物质，凝胶颗粒在合适的溶剂中浸泡合??后，再以同一溶剂洗脱。因此，混合样品如同“过筛”一样，因分子大小的不同得以彼此分开。 ;; 将作为固相成分的不溶性基质，例如葡聚糖凝胶、纤维素、树脂等填充到柱子中，用平衡液平衡。 然后加样品，再用适当的溶剂洗脱。 样品中各种成分通过柱子取决于与固相成分的相互作用，最后以不同速率被洗脱出来，达到将各个成分分离的目的。;离心;;蛋白质纯度的鉴定;色谱纯;蛋白质鉴定;1.2氨基酸组成及顺序分析;1.3 空间结构分析;1.4 免疫印迹鉴定;蛋白质;Thank you!