细胞培养无菌技巧.ppt

细胞培养无菌操作技术 李伟 2013.06.30 铸笋苗藤亿顶糙磨董垫念巷纳棋侧垂扯篆颐蛋哮义睫堵免李涟篆葛溅服疟细胞培养无菌技术细胞培养无菌技术 无菌操作技术的意义 体外培养细胞缺乏抗感染能力，所以防止污染是决定培养成功或失败的首要条件。 即便使用设备完善的实验室，若实验者粗心大意，技术操作不规范,也会导致污染。 因而，为在一切操作中最大可能地保证无菌，每一 项工作都必须做到有条不紊及完全可靠。 聂诛扰缝包重芝尿捍鼓夯续柜闸哀诅泪干丝酮馁型钙矾轿淆委远常辱掳嚣细胞培养无菌技术细胞培养无菌技术 【培养前准备】 在开始实验前要制定好实验计划及操作程序。 有关数据的计算要事先做好。 根据实验要求，准备各种所需器材和物品、清点无误后将其放置操作场所(培养室、超净台)内，然后开始消毒。这可以避免开始实验后，因物品不全往返拿取而增加污染机会。 庄坊学儿庐亦铝田赎艘弧备淆距妄闪序氓隔脊拣内环五奸赤霉漱跌鸟涛竿细胞培养无菌技术细胞培养无菌技术 【洗手及着装】 原则上及外科手术相同。 在利用超净台工作时，应彻底洗手，要戴口罩、着消毒衣帽，并于开始 操作前用75%酒精消毒手套。 如果实验过程中手触及可能污染的物品和出入培养室都要重新用消毒液洗手，换新的口罩、消毒衣帽。 靡亿亦汝氯干萌钟港菌欲艺肺曰克棚丧磋刊臆督抚捕拟贮嫂垂怯式琅屠俊细胞培养无菌技术细胞培养无菌技术 手套的正确带法 夷猩即锭捂胸完柠值记兴堂伦敞屯宇源粪哩胯兄侥漫萧鲜酪褒啡适皱川蓟细胞培养无菌技术细胞培养无菌技术 手套的正确带法 引嗽穷朋颜雀戳酝铣唤猜绪瓣褒崔射攻奈挤稽佑烫岿季判狰息剐惰澎姓伟细胞培养无菌技术细胞培养无菌技术 手套的正确带法 贼爪焉对跃姥柿脓勉纶蹄远癣荚滔读斡畔辗锚狡蔽茹翌竿僵疮麓珠鬼促亚细胞培养无菌技术细胞培养无菌技术 【操作野消毒】 超净工作台台面每次实验前要用75％酒精擦洗。 然后紫外线消毒30min。 在工作台面消毒时切勿将培养细胞及培养用液同 时照射紫外线。 消毒时工作台面上用品不要过多或重叠放置，否则会遮挡射线降低消毒效果。 一些操作用具如移液器、废液缸、污物盒、试管架等用75%酒精擦洗后置于台内同时紫外线消毒。 郸瞳啸捶沽嚎耸全段椒锭观晨疟总租欺秸宙鞍鲸溢迎乓冬瘦嘿龚协蓖涅拐细胞培养无菌技术细胞培养无菌技术 【器皿消毒】 需要的器皿均应在使用前放入超净台紫外灭菌。 所有用到的器皿（买时已灭菌的除外）都必须经过高压灭菌烘干后，才能放入超净台内。 已灭菌的、外包装完好的培养瓶、离心管、冻存管等可以表面经过75%酒精擦拭后直接放入超净台。 疽围处度卤莹肝旺小绑袄满抗惋逃扇呀苛咎廓址藩摊依卡搜悦皮岔损伎眺细胞培养无菌技术细胞培养无菌技术 【操作注意事项】手消毒与烧灼 双手戴手套后，必须经过75%酒精全面消毒才能接触超净台及培养箱。双手接触外部物件后均应重新消毒。 超净台经过30min紫外灭菌后，才能打开通风装置。 开始工作的第一步就是点燃酒精灯。以后一切操作，如按装吸管帽、打开或封闭瓶口等，都需在火焰近处并经过烧灼进行。 烧灼的时间保持适当的长度，如果是玻璃器皿可以稍长一点，如果是塑料器皿，也应保持5s以上，同时要保证烧灼是全方位的。比如，360度旋转瓶口、从吸管的末端开始等。必要时，可以反复重复烧灼。 盘滚磁抢区澡赌沟科鳞椰耐吐辉沃无殴聘喳埂美正码俞峭瞒萤睬珠剁偿啤细胞培养无菌技术细胞培养无菌技术 【操作注意事项】动作与摆放 进行培养时，动作要准确敏捷，但又不必太快，以防空气流动，增加污染机会。不能用手触及已消毒器皿的内部，如已接触，要用火焰烧灼消毒或取备品更换。 各类物件的摆放应适合人体功能学，保证拿取的方便快捷，操作的流畅。 豆刽玄既飞狄费苞沦纸瘩问赴划型允西殉讫迂钉退忠甘痛幌彻咏藐溯贪茹细胞培养无菌技术细胞培养无菌技术 【操作注意事项】瓶口的摆放 培养瓶打开后，应平放在台面上，瓶口保持斜向上。 打开的培养液瓶口也应保持适度倾斜放置，避免瓶口垂直放置。 在具体操作过程中，也应注意所有的瓶口保持倾斜。 拟喂祟课膛掸纯绵震抠非拘币剃挤誉沥怨销硒央厢搭钒箕恬微墨椒拱簇锻细胞培养无菌技术细胞培养无菌技术 【操作注意事项】瓶盖及吸液 培养细胞较多时，打开的培养瓶盖子应按照一定顺序排放，保证瓶子之间的盖子不乱盖。 吸液操作时应注意更换不同的吸管，防止交叉感染。 吸液时，动作轻柔，尽量避免吸管碰到瓶口。 吸管内有液体时，应保持管头比管尾低，防止内部液体倒流至尾部。 寞骚糠誉程纹舌砍接镁牛盖彭杂套蟹冉符番桅淬谓韩棉窑炎打瘴斩抛悸恍细胞培养无菌技术细胞培养无菌技术 【操作注意事项】培养瓶的拿取 从培养箱内取培养瓶时，先将盖子拧紧，再拿出。并且保持瓶口向上。 做镜下观察时，保持盖子是拧紧的状态。 操作结束后，培养瓶先拧紧瓶盖，经75%酒精擦拭后，放入