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PCR技术在呼吸道病毒检测中的应用进展 医学综述2011年9月第17卷第17期MedicalRecapitulate,Sep.2011,Vo1.17,No.17 PCR技术在呼吸道病毒检测中的应用进展 石晶A(综述),孔晓慧(审校) (首都医科大学附属北京儿童医院儿科研究所免疫室,北京100045) 中图分类号:R725.6文献标识码:A文章编号:1006-2084(2011)17—2683-04 摘要:反转录酶一聚合酶链锁反应(RT.PCR)在病毒监测中的作用随着其自身的发展越来越重 要,它从最初的RT—PCR到与其他各项新兴技术相结合,逐渐发展成实时荧光定量RT—PCR,多重RT— PCR,多重实时荧光RT—PCR,多重PCR技术为基础的反式线点杂交,环介导的反转录等温扩增,反转 录为基础的电喷雾电离质谱技术,扩增片段长度多态性分析等各项技术.现对这几项技术在病毒检 测中的优点与不足予以综述. 关键词:病毒;聚合酶链反应;检测 TheDevelopmentofPCRApplicationintheDetectionofRespiratoryVirusSHIring,KONGXiao- hui.(DepartmentofImmunologyLaboratoryinPediatricResearchInstitute,BeijingChildrenSHospitalAffilia- tedtoCapitalMedwalUniversy,Beijing100045.China) Abstract:Thefunctionofreversetranscriptase—PCR(RT-PCR)hasbecomemoreandm0reimportant inthedetectionofviruswithitsdevelopment,whichhasevolvedfromtheinitialRT—PCRtoanumberof methodscombinedwithothereme~ingtechniques,forexample,real—timefluorescencequantitativeRT—PCR, mllhipleRT-PCR.multiplereal—timefluorescenceRT-PCR.multiplexPCR—basedrevefselineblothybridiza- tion,loop—mediatedisothermalamplificationmulti.1ocusRT.PCRfollowedbyelectrosprayionizationmass spectrometry,amplifiedfragmentlengthpolymorphism,etc.,theprosandconsofwhichayetobereviewed here. Keywords:Virus;Polymerasechainreaction;Detection 聚合酶链反应(polymerasechainreaction,PCR) 自从问世以来,经过几十年的发展,其在各项领域中 的作用已愈显重要,特别是在各种病毒的快速准确 检测中,更是以往的传统检测方法所不能比拟的. PCR的基本过程类似于DNA的天然复制,特异性依 赖于靶序列两端互补的寡核苷酸引物.整个过程由 变性.退火一延伸3个基本反应步骤构成.通常,每完 成一个循环需时2—4min,2～3h就能将靶核苷酸扩 增放大几百万倍¨.目前的PCR技术已有十几种, 每种都有其优缺点,下面对各种PCR技术在病毒检 测中的应用作简要综述. 1反转录聚合酶链反应(reversetranscriptPCR, RT—PCR) RTPCR是提取组织或细胞中的总RNA,以其中 的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用 反转录酶反转录成cDNA.再以cDNA为模板进行 PCR扩增,而获得目的基因或检测基因表达.RT—PCR 使RNA检测的敏感度提高了几个数量级,使一些极 为微量RNA样品分析成为可能.该技术主要用于: 分析基因的转录产物,获取目的基因,合成cDNA探 针,构建RNA高效转录系统.采用敏感性较高的 RT.PCR方法,总的病毒检出率提高,且检测的病毒 种类比较多,对目前报道的可引起儿童呼吸道感染 的9种常见病毒病原包括新发现的人类博卡病毒均 能进行检测. 2PCR-免疫 在常规的分子生物学中,对PCR扩增的产物的 ? 2683? 分析主要是采用琼脂糖或聚 丙烯酰胺凝胶电泳,溴化乙 锭染色,在紫外灯下观察,拍 照.这种方法简单经济,但 是其缺点是存在假阴性,假 阳性,溴化乙锭污染环境,紫 外线伤害人体,只能进行定 性或半定量分析,不能准确 定量.目前发展的PCR一 免疫,即用