PELABMP-2分化.PDF

·68 · doi 10.3969/j.issn. 1673-4254.2017.01.12 J South Med Univ, 2017, 37(1): 68-74 基础研究 FGF-FGF-22/PELA/BMP-/PELA/BMP-22 微囊支架促进大鼠骨膜来源干细胞的成骨微囊支架促进大鼠骨膜来源干细胞的成骨 分化分化 殷 杰，邱素均，高浚淮，赵胜利，闵少雄 南方医科大学珠江医院骨科，广东 广州 510280 摘要：目的观察成纤维细胞生长因子-2/聚乳酸-聚乙二醇-聚乳酸/骨形态发生蛋白-2（FGF-2/PELA/BMP-2）微囊支架对SD 大 鼠骨膜来源干细胞成骨分化作用。方法 提取SD 大鼠骨膜来源干细胞（PDSC），进行流式细胞学表面标记物鉴定及成骨、成软 骨、成脂三系诱导并进行茜素红、甲苯胺蓝、阿利新蓝、油红O 染色及免疫荧光实验。制备FGF-2/PELA/BMP-2、FGF-2/PELA、 PELA/BMP-2、PELA 四组材料，进行扫描电镜（SEM）观察微囊表面，通过ELISA 实验制作两因子的控释曲线。将4 组材料浸提 液与第3 代骨膜来源干细胞进行共培养，分别在7、14 d 进行碱性磷酸酶（AKP）活性检测，分别在7、14、21 d 进行qRT-PCR 成骨 基因表达检测，观察比较各组PDSC 成骨分化能力，数据汇总后进行统计学分析。结果 流式细胞学表面标记物鉴定显示PDSC 表达间充质干细胞表面标记物，三系诱导分化染色结果表面PDSC 具有成骨、成软骨、成脂等多向分化能力。AKP 活性结果显 示，FGF-2/PELA/BMP-2 组在PDSC 培养的7 d及14 d ，AKP 活性最高，差异显著。FGF-2/PELA/BMP-2 组的qRT-PCR 结果提示 RunX-2、OCN 表达量均高于其他组，且在第14天RunX-2 表达量达到顶峰，OCN 呈持续增长趋势。结论 FGF-2/PELA/BMP-2 仿生控释微囊支架中的细胞因子活性得以保留，并相对其他实验组具有更高的促进PDSC 成骨分化的能力。 关键词：骨膜来源干细胞；成纤维细胞生长因子-2 ；骨形态发生蛋白-2 FGF-2/PELA/BMP-2 microcapsule scaffold promotes osteogenic differentiation of rat periosteum-derived stem cells in vitro YIN Jie, QIU Sujun, GAO Junhuai, ZHAO Shengli, MIN Shaoxiong Department of Orthopedics, Zhujiang Hospital, Southern Medical University, Guangzhou 510280, China Abstract: Objective To observe the effect of a microencapsule scaffold capable of sustained release of fibroblast growth factor-2 (FGF-2) and bone morphogenetic protein-2 (BMP-2) in promoting the osteogenic differentiation of rat periosteum-derived stem cells (PDSCs) in vitro. Methods PDSCs from 4-week-old SD rats, after identification of the surface markers using flow cytometry, were induced to differentiate into osteoblast, chondroblast, and adipocyte lineages. The differentiated cells were verified by staining with Alizarin red, toluidine blue, alcian blue, oil red O and by i