大肠菌群检验(培训用).ppt

大肠菌群检测 检验程序 固体样品称量 用镊子取酒精棉擦手，点燃酒精灯； 打开稀释瓶盖，放在天平上，等显示屏上的数字稳定后，按“去皮”键，当显示屏上的数字显示为“0”时，可开始称量。 初 发 酵 取（带上试管架）： 双料管3支 单料管6支 装有0.85%灭菌生理盐水的锥形瓶1个 装有9mL 0.85%灭菌生理盐水的试管1支（注：样品为固体时需要） 操 作 步 骤 1. 用酒精棉消毒操作台 操 作 步 骤 2. 用酒精棉消毒双手 操 作 步 骤 3. 点燃酒精灯 操 作 步 骤 4. 为装有培养基的试管编号 为试管编号 编号原则： 固体样品：1、0.1、0.01（表示加入的固体样品为1g、0.1g、0.01g） 液体样品：10、1、0.1（表示加入的液体样品为10mL、1mL、0.1mL） 用量筒量取225mL0.85%灭菌生理盐水至稀释瓶中。（注意：稀释瓶、带塞锥形瓶开盖前要过火，量筒、装有0.85%灭菌生理盐水的锥形瓶及其塞子应放在酒精灯周围15cm的范围内） 液体样品： 吸取25mL液体样品至稀释瓶中，加入225mL0.85%灭菌生理盐水，盖上盖子，混匀； 从稀释瓶中分别吸取1mL被稀释10倍的饮用水至最后三支单料管中。 固体样品： 从稀释瓶中吸取1mL样液至装有9mL0.85%灭菌生理盐水的试管中，盖上盖子，混匀； 从该试管中分别吸取1mL样液至最后三支单料管中。 观察初发酵结果 取回初发酵结果，观察。确定有几支初发酵管内的小倒管中有气泡产生。 根据对初发酵结果的观察，有几支小倒管中有气泡，则取几支煌绿乳糖胆盐复发酵管。 将接种好的初发酵管和复发酵管放入恒温培养箱。 注意选择设置为36℃±1℃的培养箱。 观察复发酵结果，小倒管内有气泡为阳性（+），无气泡为阴性（-）。 查MPN表 填写答题卷 实验记录 无菌操作 提示：操作过程的注意事项 1. 打开有盖子的器皿或容器（如试管、锥形瓶、稀释瓶、样品罐等）前，要过火。过火的部位为盖子与试管的接缝处。 提示：操作过程的注意事项 2. 关盖前，盖子和试管或容器口要分别过火。 提示：操作过程的注意事项 3. 整个操作应在以酒精灯为中心，半径为15cm的范围内。 小 结 本次检验操作共取： 双料管3支，单料管6支，装有灭菌生理盐水的锥形瓶1个，装有9mL灭菌生理盐水的试管1支（固体样品），复发酵管若干支（根据初发酵结果） 本次检验操作共用： 固体样品：10mL吸量管1支，1mL吸量管2支，接种环 液体样品：25mL移液管1支，10mL吸量管1支，1mL吸量管2支，接种环 * * 检 样 25g(mL)样品+225mL稀释液，均质 10倍系列稀释 选择适宜3个连续稀释度的样品匀液，接种至 月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤管 不产气 产气 煌绿乳糖胆盐（BGLB)肉汤 不产气 产气 大肠菌群阴性 大肠菌群阳性 查MPN表 报告结果 36℃±1℃ 48h±2h 36℃±1℃ 48h±2h 检 样 初 发 酵 复发酵 报告 检 样 固体样品：在电子天平上称取25g + 225mL0.85%灭菌生理 盐水 液体样品：直接取用 固体样品存放罐 去皮键 双 料 单 料 1 1 1 0.1 0.1 0.1 0.01 0.01 0.01 10 10 10 1 1 1 0.1 0.1 0.1 固体样品称量后处理 液 体 样 品 液体样品：直接吸取10mL样液至双料管中 固体样品：从稀释瓶中吸取10mL样液至双料管中 10 10 10 1 1 1 10mL 10mL 10mL 注意： 加样液后不能振摇试管。 液 体 样 品 液体样品：直接吸取1mL样液至单料管中 固体样品：从稀释瓶中吸取1mL样液至单料管中 1 1 1 0.1 0.1 0.1 1mL 1mL 1mL 注意： 加样液后不能振摇试管。 液 体 样 品 0.1 0.1 0.1 25mL 1mL 1mL 1mL 注意： 加样液后不能振摇试管。 0.01 0.01 0.01 1mL 1mL 1mL 1mL 注意： 将样液加入装有稀释液的试管后，振摇试管，混匀。 样液加入培养基后不能振摇试管。 内有小倒管 复 发 酵 在有气泡的初发酵管后的相应位置放上复发酵管 用接种环移取有气泡初发酵管中液体一环至相对应的复发酵管中。（注意接种环的灼烧、冷却） 36℃±1 ℃ 48h ±2h + - - + - - - + - 注：初发酵管产气，复发酵结果可能产气，也可能不产气。 1 1 1 1