土壤微生物数量测定.doc

土壤微生物数量测定 （一）培养基的制备： Ⅰ测定微生物总量培养基： 1. 细菌培养基（牛肉膏蛋白胨琼脂培养基） 牛肉膏Beefextract 5.0g 蛋白胨Peptone 10.0g NaCI 5.0g 蒸馏水H20 1000m1 PH 7.2~7.4 2. 放线菌培养基 （高氏1号琼脂培养基） 可溶性淀粉 20g KNO3 1g K2HPO4 0.5g MgSO4? 7H2O 0.5g NaCl 0.05g FeSO4? 7H2O 0.01g pH 7.2-7.4 注：配制时，先用少量冷水，将淀粉调成糊状，倒入少于所需水量的沸水中，在火上加热，边搅拌边依次逐一溶化其他成分，溶化后，补足水分到1000ml，调pH。 另：倒平板之前，在溶化的培养基中加重铬酸钾溶液，每300mL培养基加3%重铬酸钾1mL(l00ppm)。 3. 真菌培养基（马丁（Martin）-孟加拉红琼脂培养基） 葡萄糖 10.0g MgSO4.7H2O O.5g 蛋白胨 5.0g 孟加拉红 33.4mg （或者每升加1%溶液3.3mL） K2HPO4 1g 蒸馏水H20 1000m1 PH 自然(4~5) 注：⑴灭菌前加卡那霉素20μg/ml，或者倒平板之前加链霉素。 ⑵倒平板之前加乳酸，每100mL培养基加0.lmL。 以上培养基皆加琼脂15g/L。 Ⅱ测定功能菌所用培养基： 1.亚硝酸细菌培养基（改良的斯蒂芬逊（Stephenson）培养基A） (NH4)2SO4 2.0g NaH2PO4 0.25g MnSO4·4H2O 0.01g MgSO4·7H2O 0.03g K2HPO4 0.75g CaCO3 5.0g 蒸馏水 1000ml PH 7.2 注：CaCO3最后加，不需要溶解，直接调PH，培养基中有这个成分是为了缓冲pH。因为硝化细菌的生长会产生酸化效应，使得氢离子过剩，到了一定程度硝化作用将无法继续，所以要碱性物质平衡酸碱。下同。 2.硝酸细菌培养基（改良的斯蒂芬逊（Stephenson）培养基B） NaH2PO4 0.25g K2HPO4 0.75g MgSO4·7H2O 0.03g MnSO4·4H2O 0.01g CaCO3 1.0g Na2CO3 1.0g NaNO2 1.0g 蒸馏水 1000ml PH 7.2 3. 反硝化细菌培养基 柠檬酸钠 5.0 g KNO3 2.0 g KH2PO4 1.0 g, K2HPO4 1.0 g MgSO4·7H2O 0.2 g 蒸馏水 1000 ml pH值 7.2~7.5 4.好气性自生固氮菌培养基（改良阿须贝(Ashby)无氮培养基） 苯甲酸钠 1.5 g K2HPO4 0.2 g MgSO4·7H2O 0.2 g NaCl 0.2 g CaSO4·2H2O 0.1 g PH 7.4—7.6 注：在培养基分装入试管时，每管加入一1cm滤纸长条，要露出液面。 5.氨氧化细菌培养基（蛋白胨氨化培养基） K2HPO4