7电泳检定法.PDF

生化科技學系 酵素純化與分析 7 外加電流電壓 Input current, voltage 7 電泳檢定法： - ANODE CATHODE + + - 7.1 電泳原理： Friction Charge 7.1.1 蛋白質的泳動率： 分子量分子形狀 分子的等電點 Molecular weight , shape Isoelectric point a. 泳動率： 帶電分子在電場中會被電流緩慢移動，是為泳動 ，其泳動程度的大小稱為泳動率 (mobility) 。泳動率與分子上電荷密度成正比，而與其分子的摩擦力成反比： (所外加 電壓mV) ×(分子之 淨電荷密度) 泳動率 ～ ──────────────────── 分子與介質間之 摩擦力 上述之摩擦力，決定於此分子之大小、形狀。分子量大者摩擦力大，泳動率小；而球 形分子摩擦力較小，泳動率大。 b. 蛋白質的帶電性： 蛋白質分子所帶的淨電荷，取決於環境pH 的高低 。若環境pH 高於其pI ，此蛋白質 帶淨負電，反之帶正電；若剛好等於pI ，則淨電荷為零 (正電數目等於負電) 。因此同 一分子在不同pH 環境下，可能帶有不同 淨電荷(圖7.1) 。 圖 Buffer pH 7.1 10 環 9 境 影 8 響 7 分 子 Isoelectric point, 6 pI 的 5 帶 4 電 性 3 質 + 0 - - Net Charge of a Protein c. 蛋白質大多由負極向正極泳動： 在電泳系統中電子由負極流向正極，因此帶負電的分子會跑向正極，帶正電的分子往 負極跑，不帶電者則不易泳動。大部分電泳系統的pH 定在 8.3 ，因為大多數蛋白質 的pI 都小於8.3 ，因此都帶負電往正極跑 ，但若蛋白質pI = 8.3 就跑不動。 EPA 2018