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EP6色谱分离技术-仪器信息网
EP6
EP6
EEPP66色谱分离技术
色谱分离技术是多级分离方法,样品组分要分配到两相中,一种是固定相,一种
是流动相。固定相可能是一种固体或者是固体上支持的液体或凝胶。固定相可以填充
到柱中,或涂布为一层,或分散为一个薄膜等。流动相可能是气态或液体或超临界流
体。分离原理可能是基于吸收、质量分布、离子交换等,或可能基于分子的理化性质
不同,如粒度、质量、体积等。
本章包括系统适应性一般参数的定义和计算,以及一般适用性要求。在下列章节
给出了分离原理、仪器和方法:
--纸层析(2.2.26)
--TLC 色谱法(2.2.27)
--气相色谱法(2.2.28)
--液相色谱法(2.2.29)
--分子排阻色谱法(2.2.30)
--超临界流体色谱法(2.2.45)
定义
下列定义用于计算专论中的限度。
对于某些设备,某些参数(如信噪比)可以用生产商提供的软件计算。用户有责
任确保软件中的计算方法与欧洲药典的要求相一致。如果不同,必需进行校正。
色谱图
一张色谱图是检测器响应值、流出浓度或其他数量的绘图的或其他标示,作为流
出浓度、时间、体积或距离的一种测量。理想的色谱图是基线上出现高斯峰。
保留数据
保留时间和保留体积
洗脱色谱法中的保留测量可能是保留时间(t ),由色谱图中最大峰的位置直接进行定
R
义。保留体积(V )可以通过保留时间来计算:
R
V =v×t
R R
t =保留时间或沿基线从进针处到相应组分的最大峰垂直处之间的距离。
R
v=流动相的速率。
质量分布比率
质量分布比率(Dm)(也称为容量因子 k’或保留因子k)规定如下:
固定相中溶质数量 Vs
Dm= =Kc
流动相中溶质数量 VM
Kc=平衡分布系数(也称为分布常数)
Vs= 固定相体积
V = 流动相体积
M
一个组分的质量分布比率可以使用下列公式从色谱图中测定:
t -t
R M
Dm=
tM
t =保留时间(或体积)或沿基线从进针处到相应组分的最大峰垂直处之间的距离。
R
t =保持时间(或体积):时间(或体积)或沿基线从进针处到一个未保留组分的最大
M
峰垂直处之间的距离。
分布系数
在分子排阻色谱法中,一个特定柱子中的一个组分的洗脱性质可以通过分布系数(Ko)
表示,计算公式如下:
t -t
R o
Ko=
t-t
t o
t =保留时间(或体积)或沿基线从进针处到相应组分的最大峰垂直处之间的距离。
R
t =保持时间(或体积):时间(或体积)或沿基线从进针处到一个未保留组分的最大
o
峰垂直处之间的距离。
t=保留时间(或体积)或沿基线从进针处到相应的一个组分的最大峰垂直处之间的距t
离,这个组分可以全部通过固定相的小孔。
延迟因子
在平面色谱法中,延迟因子(R )(也称为保留因子R)是从原点到斑点中心的距离
F f
与原点到溶剂前沿的距离的比值。
b
R =
F
a
b= 分析物的移动距离
a=溶剂前沿的移动距离。
色谱数据
峰可以用峰面积(A)、或峰高(h)和半峰高的峰宽(w )、或峰高和变形点之间的
h
峰宽(w)来定义。在高斯峰(图2.2.46.-1)中有如下关系:i
w =1.18w
h i
图2.2.46.-1
对称因子
一个峰的对称因子(As)(或拖尾因子)(图 2.2.46.-2)计算如下:
w0.05
As=
2d
w = 在峰高的二十分之一处的峰宽,
0.05
d= 最高峰的垂直处与二十分之一峰高处的的前边沿处之间的距离。
值1.0表示完全(理想)对称。
图2.2
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