关于表面等离子体共振技术用鸡蛋黄抗体IgY测定人血清中转铁蛋白.pdf

V01．33 高等学校化学学报 No．6 2012年6月 CHEMICALJOURNALOFCHlNESEUNIVERS几1ES 1177一11引 基于表面等离子体共振技术用鸡蛋黄抗体 IgY测定人血清中转铁蛋白 王春宇1，冯锋1’2，白云峰2，陈泽忠2，田茂忠2，邱建丁1，倪永年1 (I，南昌大学化学系，南昌33003l； 2．山西大同大学有机化学研究所，大同037009) 摘要采用表面等离子体共振(sPR)方法，用鸡蛋黄抗体(IgY)取代传统免疫检测中哺乳动物抗体lgG作为 识别分子偶联于cM5传感芯片上，对人血清中的转铁蛋白进行了检测．考察了IgY在传感芯片上的偶联条 n昏／mL范围内具有良好的线性关系，检出限为39．56 sPR响应信号和转铁蛋白浓度在50一500 n∥IIlI』，对人 血清样品检测的日间变异系数8％，日内变异系数5％，平均回收率为86．22％～94．5l％． 关键词表面等离子体共振；鸡蛋黄抗体；人血清；转铁蛋白 中图分类号0657 文献标识码A DOI：lO．3969“．isⅫ．025l—0790．2012．06．01l 转铁蛋白是血清中结合并转运铁的口球蛋白…，血清转铁蛋白的含量变化可反映多种疾病，患有 缺铁性贫血、急性肝炎及急性炎症的病人血清中转铁蛋白的含量会增多；而患有肾病综合征、肝硬化 及恶性肿瘤等疾病时，人血清中转铁蛋白的含量会减少．传统的人血清中转铁蛋白含量的检测方法主 要有免疫比浊法旧J、酶联免疫吸附法。3J、放射免疫法¨1及压电免疫分析法¨’等．与这些方法相比，表 面等离子体共振(su出ce plasmon 处理、免标记、样品用量少和可快速实时检测生物分子相互作用的全过程等优点【6’7o．传统检测方法中 用的抗体多为哺乳动物抗体IgG，而IgG能激活血清中的补体系统旧J，进而影响抗原抗体的有效化合 价；且IgG还会与血清中的类风湿因子和人抗鼠抗体等产生非特异性结合，在免疫检测中产生假阴性 或假阳性结果．鸡蛋黄抗体(19Y)是从免疫母鸡所产鸡蛋的蛋黄中提取和纯化出来的抗体．与哺乳动 物的IgG相比，IgY不与哺乳动物免疫球蛋白发生交叉反应，不与类风湿因子、人抗鼠抗体或Fc受体 结合，不会激活哺乳动物的补体系统，可以避免免疫检测中产生假阴性或假阳性现象；且IgY具有耐 热、耐酸、稳定及成本低等特点一““．Vikinge等¨4。通过实验汪明，在基于sPR技术所进行的检测中， 采用I“作抗体可以降低非特异性吸附，避免假阴性和假阳性结果，改善sPR在人血清抗原检测中的 应用． 本文以鸡蛋黄抗体I“代替哺乳动物抗体IgG用于sPR对人血清中转铁蛋白的实时检测，实验证 明该方法简单可行，提供了用SPR检测血清抗原的新试剂和新方法，为高特异性、人性化的蛋黄抗体 IgY在生化检测中的进一步应用提供了理论依据． 1 实验部分 1．1仪器与试剂 Biosensor BIAcorex型表面等离子体共振仪(Phannacia moL／LHEPEs+O．15moL／LNacl+3 n蚰oL／LEDTA+0．05％surfacIant 溶液(pH=7．4，O．01 P20)，pH= 收稿日期：201I．07．21． 基金项目；国家自然科学基金(批准号和山西省自然科学基金(批准号：2∞90IlOl5-1)资助． 万方数据 高等学校化学学报 Biosensor