基于目标物诱导置换和纳米金催化的新型荧光技术检测腺苷.pdfVIP

基于目标物诱导置换和纳米金催化的新型荧光技术检测腺苷.pdf

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V01.33 高等学校化学学报 No.8 CHEMICALOFCHINESEUNIVERSⅢES 1692—1697 2012年8月 JOURNAL 基于目标物诱导置换及纳米金催化的 新型荧光技术检测腺苷 刘雪平1”,欧阳湘元1,吴会旺1,沈国励‘,俞汝勤1 (1.湖南大学化学化工学院,化学生物传感与化学计量学国家重点实验室,长沙410082; 2.河南城建学院环境与市政工程系,平顶山467036) 摘要在一定条件下,磁性纳米颗粒上修饰的腺苷核酸适体与纳米金标记的核酸探针杂交;再加入目标物 腺苷诱导适体构象变换,并置换出金标探针;经磁场分离后,游离的金标探针进一步用于催化抗坏血酸还原 铜离子,使铜离子对钙黄绿索的荧光猝灭得到抑制.由于极少量的纳米金能够催化大量铜离子还原并沉积 在其表面,铜离子浓度急剧降低,从而改变钙黄绿素的荧光信号.实验结果表明,腺苷的动力学响应浓度范 围为100 nmol/L,检出限低至80 pmoL/L~10 pmol/L.核酸适体的高度特异识别性能保证了该方法具有良好 的选择性. 关键词纳米金;催化沉积;磁性纳米颗粒;核酸适体;荧光猝灭抑制 中图分类号0657 文献标识码A DOI:10.3969/j.issn.0251旬790.2012.08.OII 纳米金具有独特的物理和化学性质,如易制备、密度高、介电常数大以及良好的生物相容性等. 它作为生物标记物在临床诊断、食品安全和环境监测等领域中应用非常广泛¨“J.纳米金具有晶核催 化功能,在还原剂存在下能够催化金属离子还原并沉积在颗粒表面,增强光学或电学检测信号,改善 测定的灵敏度¨一’7J.Ma等∞o采用纳米金种方法,利用盐酸羟胺还原氯金酸,使纳米金长大,目视即可 检测到10 pg/mL的人免疫球蛋白IgG. 磁性纳米颗粒具有良好的生物相容性以及快速简便的磁分离性能,已被广泛应用于免疫检测、 DNA纯化和测定及磁控输送抗癌药物等领域.结合磁性纳米颗粒和纳米金的优异性能灵敏检测蛋白 质和核酸已见报道¨“…. 核酸适体因其在特异性、固定化及再生等方面具有的明显优势,逐渐成为化学生物传感器设计中 的重要部分¨l,12J.Lu等【l纠利用腺苷核酸适体与2种金标核酸探针杂交拉近颗粒问的距离,使纳米金 团聚,再加入目标物诱导适体构象变换,使金标探针解离下来,纳米金恢复红色.但该方法过程繁琐、 灵敏度较低.本文在此基础上提出一种用于检测腺苷的新型荧光分析方法.将其中一条含腺苷适体部 分的DNA链连接到磁珠上,另一条探针则通过混合自组装方法固定到纳米金表面,采用2条核酸链杂 交简化了分析步骤.对金标探针采用混合组装模式,既保证了其稳定性,又降低了纳米金表面与适体 杂交的核酸探针的密度,有利于改善灵敏度.此外,荧光分析技术的应用进一步提高了测定的灵敏度. 1 实验部分 ● 1.1试剂与仪器 (P1):5 7. 收稿日期:2011.10—10. 联系人简介:俞汝勤,男,教授,博士生导师,中国科学院院士,主要从事化学生物传感与化学计量学研究. E—mail:rqyu@hnu.edu.cn 万方数据 No.8 刘雪平等:基于目标物诱导置换及纳米金催化的新型荧光技术检测腺苷 基碳二亚胺(EI)C,美国Sigma公司);N一羟基丁二酰亚胺(NHS,美国Aerosorganics公司);链霉亲和 均粒径为148nill,上海奥润微纳公司);其它化学试剂均为分析纯,实验用水为超纯水. 10 mmol/L mmol/L mmol/L磷酸缓冲溶液(PBS,由10Na2HP04和

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