用酵母双杂交技术筛选及HSPC016相互作用的蛋白.pdf

生堡座然拄袭盍2Q!!生!旦筮丝鲞筮!翅￡蜒nI照婴§丛，{g旦坚g垫!!，y尘!璺生理Q：l ·论著· 16 用酵母双杂交技术筛选与HSPC0 相互作用的蛋白 宋志强孙丽华都飞 【摘要】目的采用酵母双杂交技术筛选毛乳头细胞中与造血干细胞(hematopoietiestem／progenitor cens，HSPC)分化相关基因HSPCOl6相互作用的蛋白，了解其参与调控毛乳头细胞凝集性生长的分子机制。 方法应用酵母双杂交系统，将构建的pGBKT7一HSPC016诱饵质粒与含原代人毛乳头细胞cDNA文库质 粒的酵母Y187进行配合，筛选与HSPC016相互作用的蛋白，通过回复性杂交试验验证其可靠性，并对阳性 克隆进行测序和生物信息学分析。结果筛选出4个与HSPC016有相互作用的蛋白，包括转录因子叉头框 box 蛋白01(forkheadOl，FOXOI)、丝裂原活化蛋白激酶11、磷酸次黄苷酸激酶3调节亚单位3(PIK3R3)、 肝x受体，它们均与细胞内能量代谢、转录调节相关。结论HSPC016可能通过参与细胞内活性氧水平调 节。并与细胞内参与能量和转录调节的相关信号分子相互作用，调节毛乳头细胞的凝集性生长状态。 【关键词】毛乳头细胞；HSPC016；双杂交系统技术；细胞集合 withHSPC016 s0NGZhi— of two—hybHdizafiontechnique Screeningproteinsinteracting byyeast U—huaIHAo of Medical Dermatology,SouthwestHospital,∞1ifdMilitary University, qiang,sUN Fei．Department 400038．China Chongqing allthor：HAoFei．Email：haofei@mail．tmmtl．corn．en Corresponding Toscreenand with hematopoietic 【Abstract】Objectiveidentifyproteinsinteracting stem／progenitor molecularmechanisminvolvedinthe celldifferentiation．relatedHSPC016．andto the gene explore regulationby HSPC016onthe behaviorofdermal cells．Methods aggregative papilla Byusingyeasttwo—hybridization， thebait as HSPC016Wassub．clonedinto construct gene pGBKT／to plasmid(namedpGBKT7．HSPCOl6)in AHl09．ThecDNA ofhumandermal cellsiU Y187Wasscreened yeast yeastexpressionlibrary papillae yeast