网织红计数的方法与原理.ppt

网织红细胞计数 马强虎 网织红细胞计数 1 概念、分型及形态特征 2 检测原理及方法 3 方法学评价 4 质量控制 5 参考值 6 临床意义 1.1概念： 网织红细胞是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间的过渡阶段细胞，略大于成熟红细胞，直径8.0~9.5um，其胞质中残存的嗜碱性物质核糖核酸（RNA）源自有核红细胞，嗜碱性物质RNA经碱性染料（煌焦油蓝或新亚甲蓝等）活体染色，形成蓝色或紫色的点粒状或丝网状结构沉淀物，故称作网织红细胞。 网织红细胞自骨髓释放到外周血后仍具有合成血红蛋白的能力约1~2d后，其核算物质消失殆尽，过渡为成熟红细胞。 1.2分型及形态特征： 在红细胞发育过程中，RNA含量有明显的规律性变化，即有原始阶段较为丰富，然后逐渐减低，至细胞完全成熟后消失或接近消失，即红细胞中网线状结构越多，表示细胞越幼稚。 ICSH根据网织红细胞的形态特征和成熟程度将Ret分为4型： 2 检测原理及方法 2.1检测原理 网织红细胞的核糖核酸以弥散胶体状态存在。常规细胞染色法在涂片及染色过程中对细胞进行了固定，使网织红细胞的核酸物质即使着色也难于在普通显微镜下识别。Ret须经活体染色或荧光染色后才可用显微镜识别或经仪器计算分离。 因此就有两大类计数方法：显微镜计数法和仪器计数法。 2.2显微镜计数法（玻片法、试管法和Miller窥盘计数法） 。 .试管法 1.取小试管滴加2滴10g/L的煌焦油蓝生理盐水，混匀； 2.加等量（2滴）血液（末梢血或EDTA-K2抗凝静脉血），混匀； 3.置37℃静置15-20Min后，取一滴制成玻片； 4.油镜下至少计数1000个红细胞中网织红细胞数； 5.计算：网织红细胞=计数1000个红细胞中的网织红细胞数÷1000 ×100% 2.3 Miller窥盘计数法（ICSH推荐使用的Ret显微镜计数法） 1．标本采集：真空采血管或普通空针采静脉血，用EDTA-K2抗凝（1.5~2.2mg/ml） 2．标本处理：同试管法 3将Miller窥盘置于目镜内 4．在低倍镜下选择红细胞分布均匀，网织红细胞着色较好的部位，按一定顺序移动视野，用油镜计数大方格内的网织红细胞数，同时计数小方格内的红细胞数。压线细胞计数：数上不数下，数左不数右 5.当小方格内计数的红细胞达到=111时，即相当于至少观察了1000个红细胞，记录在此过程中计数到的所有网织红细胞数 6．计算：网织红细胞百分数=大方格内的网织红细胞数÷（小方格内的红细胞数×9 ）×100% 7.报告方式：百分数（%）或绝对值（个/L） 网织红细胞绝对值=红细胞浓度数（ 1012 /L）×网织红细胞百分数 2.4仪器法 包括流式细胞仪法、网织红细胞计数仪法和血液分析仪法 网织红细胞计数仪法：根据荧光强度对RNA进行定量分析，精确计数网织红细胞占成熟红细胞的百分数（Ret%），可将Ret分为HFR,MFR,LFR三类,见下图： 3.方法学评价 4质量控制 4.1显微镜计数法：影响因素有操作人员对网织红细胞的识别能力，血涂片质量好坏，计数红细胞数量，计数方法等；Miller窥盘计数网织红细胞误差可减小。 4.2仪器法：出现Howell-jolly小体，有核红细胞，巨大血小板可是结果假性增高。 5参考值 网织红细胞百分数： 成人和儿童：0.005~0.025； 新生儿：0.02~0.06 网织红细胞绝对数： 成人和儿童：（24~84）×109 /L 6.临床意义 6.1．评价骨髓增生能力，判断贫血类型 6.2. 评价疗效 6.3. 放疗和化疗的监测 * * 1 概念、分型及形态特征 晚幼红细胞 网织红细胞 成熟红细胞 主要存在与外周血中 嗜碱性物质少，呈分散的细颗粒，短丝状 Ⅳ型（点粒型） 少量存在与外周血中 网状结构稀少，呈不规则点状排列 Ⅲ型（破网型） 大量存在与骨髓，外周血中很难见到 位于RBC中央、线团样，结构松散 Ⅱ型（网型） 仅在正常骨髓 RBC几乎被网织物充满 Ⅰ型（丝球型） 正常存在部位 形态特征 分型 网织红细胞 直径19mm，厚1mm的圆形玻璃 检测细胞多，精密度高，与手工法相关性好，易标准化，仪器贵；出现Howell-jolly小体，有核红细胞，巨大血小板可是结果假性增高。 仪器法 规范计算区域，减少了实验误差，ICSH推荐方法 Miller窥盘计数法 易掌握，重复性好，易复查 试管法 水份易蒸发，染色时间短，结果偏低 玻片法 简便、成