微生物菌种保藏技术进展.pdfVIP

微生物菌种保藏技术进展 微生物菌种保藏  菌种是进行微生物学研究和应用的基本材料，是 发展生物工程的重要基础条件之一，是国家的重 要生物资源。  菌种保藏要求各保藏管理中心所保藏的菌种，必 须具有该菌种的详细历史及有关实验资料。并对 其所负责保藏的菌种均应采取妥善、可靠的方法 保藏，避免菌种的污染或死亡。 《中国微生物菌种保藏管理条例》，1986年 微生物菌种保藏  基本原理是在挑选优良纯培养物并使其处于休眠 状态基础上，人为地创造一个有利于休眠的环境， 使其长期保存后仍能保持菌种原有的优良特性。  基本措施是低温、真空、干燥。 常用保藏方法  定期移植法  液体石蜡法  真空冷冻干燥法  -80℃低温冻结法  液氮超低温冻结法 定期移植法  亦称传代培养保藏法，指将菌种接种于适宜的斜面培养基 上，最适条件下培养，待得到健壮的菌体后，于4～6℃进 行保存并间隔一定时间（3-6个月）进行移植培养的一种 短期菌种保藏方法。  操作步骤： 斜面制备 接种 培养 保藏  斜面制备 培养基配制 分 装 灭 菌 摆放斜面  接 种  培 养 细菌37 ℃，1-2d 酵母28~30℃，2~3d 丝状真菌26 ℃，5~7d  保 藏 4~6℃，保藏3~6个月。 方法总结  操作简单，使用方便；  对设备和人员要求不高；  可随时使用，便于观察菌种；  工作劳动强度大，属短期保藏，保藏成本高；  菌种传代频繁，易退化、污染。 液体石蜡法  亦称矿物油保藏法，定期移植保藏法的辅助方法。指 将菌种接种在适宜的斜面培养基上，最适条件下培养至待 得到健壮的菌体后注入灭菌的液体石蜡，使其覆盖整个斜 面，再直立放置于低温（4～6℃）干燥处进行保存的一种 菌种保藏方法。 操作步骤： 优质化学纯液体石蜡 灭菌： 液体石蜡预处理 —121℃湿热灭菌30min，蒸发水分； —160 ℃干热灭菌2h ； 冷却至室温。 斜面培养物制备 灌注石蜡 液面高出斜面顶部1cm 4～6 ℃，干燥处； 保 藏 直立放置； 保藏时间1 ～2年。 方法总结  操作简单，使用比较方便；  对设备要求不高，对人员操作水平有一定要求；  工作劳动强度大，保藏成本较高；  菌种易退化、污染。 真空冷冻干燥法  指将保藏的菌种细胞或孢子悬浮于保护剂中，经预冻 后在真空条件下使水分升华，再经真空封存后保存的一种 长期菌种保存方法。  安瓿管的准备  清洗 —选用中性玻璃材质的安瓿管； —2%盐酸浸泡8～10h，自来水冲洗至中性，蒸馏水冲洗2～3次； —置于烘箱中烘干。  棉塞 打棉塞，160℃定型2h；  标签 —激光打印标签，标明菌株编号和保藏日期，大小约10×20mm 。 — 喷码于安瓿管外，160℃固